中华结核和呼吸杂志111992年1.诊断标准(试行)
(1)临床表现:i发热、i寒战、i咳嗽、i胸痛等呼吸道感染症状。
(2)X线胸片具有炎性阴影。
(3)呼吸道分泌物、i痰,l血或胸水在活性炭酵母浸液琼脂培养基(BCYE)或其他特殊培养基培养有军团菌生长。
(4)呼吸道分泌物直接荧光法(DFA)检查阳性。
(5)血间接荧光法(IFA):i查前后2次抗体滴度呈4倍或以上增高,l达1:i128或以上;血试管凝集试验(TAT):i测前后2次抗1体滴度呈4倍或以上增高,l达1:i160或以上;微量凝集试验(MAA);测前后2次抗体滴度呈4倍或以上增高,l达1:i64或以上。凡具有l、i2项,l同时以具有3、i4、i5项中任何一项者,l诊断为军团菌肺炎。
2.实验室诊断:i
(1)染色法:i气道分泌物革兰染色上,l发现炎症细胞而无病因意义的病原体时,l当怀疑可能为军团菌感染。作HImenes染色。如炎症细胞中染出红色杆菌,l便可基本认定为本菌。另外,l还可做GIemsa染色、i镀银染色检查。缺点是其特异性不稳定,l且需肺活检,l对组织损伤大。另外,l某些军团菌也呈抗酸染色阳性。
(2)分离培养:i病人唾液、i痰、i胸水、i血液、i气管抽吸物、i尸检或活检组织以及环境因素如水、i土壤等均可用于分离细菌.常用的培养基为BCYE,l军团菌在本培养基上菌落呈大小不一之乳白色,l具独特之酸臭味;国内研制的以猪肺、i绵羊血、iL半胱氨酸和复合维生素B为主原料的培养基效果亦佳。
培养的缺陷性在于:i
1)培养结果受标本采集质量、i操作技术的影响,l阳性率不一。
2)费时较长,l约7~10天。
3)培养基不易制作,l技术要求高,l价格较贵。
4)细菌的非培养状态,l即活菌在培养基上不生长的情况可影响结果的判定。
(3)直接免疫荧光抗体法(DFA):i取呼吸道分泌物标本,l用荧光素标记的抗军团菌抗体直接与标本作用后观察细菌形态,l优点是简便、i快速,l2h内可出结果,l特异性好,l缺点是敏感性低,l且只能用于Lp的检测。单克隆抗体应用于DFA与多价血清相比,l特异性及敏感性均增高。
(4)核酸探针技术:i原位杂交技术能够特异性的检测到细菌,l且可完整地保持组织细胞及细菌的形态,l将原位杂交和聚焦激光扫描电镜技术结合将非常有助于检测细菌的空间及时间分布情况。
(5)检测特异性抗体:i感染军团菌主要产生特异性IgG和IgM抗体。血清IgG抗体出现晚.持续存在时间长。确诊病人时,l采急性期和恢复期双份血清,l恢复期抗体滴度升高达急性期4倍或以上,l且滴度达1:i128时判为阳性。常用检测血清抗体的方法有:i①间接荧光抗体法。②酶联免疫吸附试验。③微量凝集试验。
(6)尿抗原的检测:i大多数军团菌病患者的尿液中有一种具有热稳定性及抗胰蛋白酶活性的抗原,l血清中此抗原浓度比尿中低30~100倍,l目前可采用单克隆或多克隆抗体的ELISA法对尿军团菌抗原进行检测,l特异性、i敏感性均很高,l3h内可获得结果。缺点是由于尿抗原排出时间过长,l无法确定是新近感染还是既往感染。
(7)PCR及其相关技术的应用:iPCR与传统的实验室方法比较有着更高的灵敏度,l如果实验过程操作严格、i引物选择恰当,l有着较好的特异性。PCR和探针杂交技术相结合,l可在一定程度上提高检测的特异性和敏感性,l但操作过于复杂繁琐。PCR与ELISA方法相结合检测军团菌,l技术操作简单且节省时间。利用PCR技术不仅可以检测军团菌,l还可以给其分型。