肠道原虫感染性疾病:溶组织内阿米巴感染

溶组织内阿米巴(Entamoeba1histolytica)感染所致的疾病统称阿米巴病(Amebiasis),l根据其主要病变部位及临床表现可分为:i①肠阿米巴病(Intesfinal1amebiasis),l病变主要在结肠,l表现为痢疾样症状;②肠外阿米巴病,l病变主要在肝、i肺或脑,l表现为各受累器官脓肿,l其中阿米巴肝脓肿最常见,l后者又称肝阿米巴病(Hepatic1amebiasis)。

(一)疾病概况

【病原学】

溶组织内阿米巴的生活史可分为滋养体和包囊2个阶段,l完成其生活史只需一种哺乳动物,l人是主要的储存宿主和寄生宿主。

1.滋养体 分大滋养体和小滋养体。大滋养体有致病力,l有定向力,l参与对宿主肠壁的侵袭;小滋养体多无致病力,l不侵袭组织,l不吞噬红细胞。当宿主免疫功能正常,l大滋养体可变为小滋养体;而当宿主健康状况下降,l小滋养体分泌溶组织酶,l并侵人肠黏膜下层转变为大滋养体。当肠腔条件改变不利于其活动时经包囊前期,l变成包囊。滋养体在传播上无重要意义,l在体外抵抗力薄弱,l容易死亡;

2.包囊 多见于隐性感染者及慢性患者粪便中。成熟包囊(感染期)具有传播作用。包囊对外环境抵抗力强,l对常用化学消毒剂耐受,l但对热和干燥很敏感。

【流行病学】

本病遍及全球,l多见于热带及亚热带。我国多见于北方,l农村高于城市,l多为散发。

1.传染源 包括慢性患者、i恢复期患者及无症状包囊携带者。急性期患者不是主要传染源。

2.传播途径吞食被包囊污染的食物和水是主要传播途径,l亦可通过污染的手、i用品、i苍蝇等间接经口传播。

3.易感性人群普遍易感,l尤多见于营养不良、i免疫力低下及接受免疫抑制剂治疗者。可重复感染。

【发病机制】

溶组织内阿米巴的侵袭力包括粘附、i酶溶解、i细胞毒、i胞噬等连续的触杀过程。成熟包囊感染人体后,l进入肠腔内,l可破囊并分裂成4个小滋养体,l寄生于结肠肠腔内(无症状带虫者)。当人体免疫力下降时,l发育成为大滋养体,l破坏组织形成小脓肿及潜形溃疡,l呈现痢疾样症状。在慢性病变中,l黏膜上皮增生,l溃疡底部形成肉芽组织,l溃疡周围见纤维组织增生肥大,l形成肠阿米巴病。寄生在肠壁的溶组织内阿米巴大滋养体经门静脉、i淋巴管或直接蔓延侵入肝,l形成肝脓肿,l以右叶为多。也可在肺、i脑等形成迁徒性脓肿。个别病例可并发直肠阴道瘘、i肠出血、i肠穿孔等。

【临床表现】

潜伏期一般为1~2周,l可短至4天,l长达1年以上。起病突然或隐匿。肠阿米巴病可有以下临床类型:i

1.无症状型(原虫携带状态)11大多数粪便内能找到阿米巴原虫而无症状,l包囊仅在常规粪便检查中发现。

2.普通型 全身症状轻,l常有低热或无发热,l起病缓慢呈间歇性腹泻又称阿米巴痢疾。典型表现为粘液血便呈暗红色或果酱样,l每日10余次,l有腥臭,l伴有里急后重、i腹胀和轻中度腹痛,l右下腹有轻度压痛。间歇期大便稀糊或基本正常。粪便镜检可发现滋养体。

3.暴发型 此型少见,l多发生于体弱和营养不良者。起病急骤,l中毒症状显著,l重病容,l有高热及极度衰竭。粪便迅速增至每日15次以上,l甚至肛门失禁,l含明显脓血与大量滋养体,l呈水样或血水样,l有奇臭,l伴呕吐、i剧烈腹痛、i里急后重及腹部明显压痛。患者有不同程度脱水与电解质紊乱,l有时可出现休克,l易并发肠出血与肠穿孔,l病死率高。

4.慢性型 常为普通型未经彻底治疗的延续,l病程可持续数月甚至数年不愈。腹泻与便秘交替出现反复发作。一般腹泻每日不超过3~5次,l粪便呈黄糊状,l带少量粘液及血液,l有腥臭,l常伴有脐周或下腹部疼痛。病程长者常伴有体重下降、i营养不良、i贫血、i肝肿大及神经衰弱等。易并发阑尾炎及肝脓肿。粪便检查可找到滋养体或包囊。

肝阿米巴病临床表现轻重与脓肿的位置和大小及有否继发细菌感染等有关。起病多缓慢,l发热呈间歇型或弛张型,l可持续数月。肝脏肿大,l有压痛及叩击痈为本病重要症状。右侧反应性胸膜炎相当多见。肝脓肿可破向其周围的脏器和组织,l引起胸腔、i肺、i心包、i胃、i肠以及腹腔的阿米巴感染,l可危及生命。

(二)检验诊断

从临床标本中查到病原体是确诊的“金标准”。

【一般检查】

肠阿米巴病时粪便外观多见脓血粘液便,l显微镜检查可见大量红细胞而白细胞较少。肝阿米巴病时粪便检查常为阴性。细菌培养阴性。外周血显示正细胞正色素性贫血,l白细胞计数(5~33)×106/L。嗜酸性粒细胞不常见。红细胞沉降率显著增加。AST和ALT增高2~6倍以上,l血清ALP增加2~3倍以上,l清蛋白可能下降而球蛋白升高。有并发症时总胆红素会升高。

【病原学检查】

1.粪便检查 使用洁净的不渗水容器采集新鲜粪便标本立即检查,l不应与尿液或消毒液混合以免杀死滋养体。从脓血和稀软部分取样,l冬秋季检查时应注意保温。检验后应将容器焚烧,l所用载玻片需用5%煤酚皂液浸泡消毒。

(1)生理盐水直接涂片法:i用竹签挑选带有脓血和粘液的粪便部分。混悬于1滴9g/L氯化钠溶液的洁净玻片上制成薄片,l观察全片有无阿米巴滋养体、i包囊。如见粘液中有活动的含红细胞的大滋养体即可确诊。大滋养体胞浆分为内外两层,l外浆透明而均匀,l折光强,l内浆呈细颗粒状,l其中可吞人红细胞。在生理盐水涂片中观察,l可见较白细胞稍大的折光性能活动的小体,l在适宜温度下运动活泼,l常伸出伪足作定向的变形运动,l称为阿米巴运动。镜检可见粘液中含有粘聚成团的红细胞和少量白细胞,l或有棱形结晶(夏科雷登晶体,lCharcot-Levden1crystal)。如气温降低,l虫体活动缓慢,l但内质含有清晰可见的暗绿色红细胞,l仍可确诊。小滋养体在生理盐水涂片中可见呈折光性小体,l伪足不明显,l运动缓慢,l内质含很多细菌而无红细胞。

(2)碘液染色法:i对慢性患者的软便或成形粪便,l需从粪便表面、i深处及粪端多处取样涂片,l在生理盐水涂片上作碘液染色以检查包囊,l碘染后包囊呈棕黄色,l包囊亦分大小两种,l相差悬殊(9~20μm),l包囊内含核常有1~4个,l隐约可见,l形态与滋养体相似,l糖原泡边缘不清,l呈浅棕色。包囊初期常有呈两端钝圆的拟染色体,l碘涂片常不着色,l在生理盐水涂片中有时可见折光性的棒状拟染色体,l对确定溶组织阿米巴原虫有重要的参考价值,l可据此来区别结肠内阿米巴与溶组织内阿米巴。结肠内阿米巴早期包囊偶亦可见到少数拟染色体,l但呈碎片状,l两端较尖细,l糖原比溶组织内阿米巴明显。每份标本应查3张涂片,l以提高检出阳性率。由于包囊的排出具有间歇性,l需隔日并连续3~5次送检,l阳性率可提高至60%~90%以上。

(3)浓集法:i常用的有①硫酸锌离心漂浮法:i对于慢性患者或带虫者,l粪便中包囊密度小,l直接湿涂片不易查见,l可用此法提高检出率;②碘醛离心沉淀法(merthiolate-formalde-hyde1centrifugal1sedimentation1MIFC):i此法可查包囊,l也可查滋养体,l在离心沉淀后达到浓集目的。而且阿米巴滋养体内浆先染成黄色,l继变为浅红色;核初成棕黄色,l后为黑色。包囊的核、i拟染色体、i糖原等都非常明显。另外,l汞碘醛液兼具灭活、i固定及防腐作用,l可暂时保存标本,l原虫形态不改变,l一年内仍可使用。据报道使用本法检查已知阳性标本,l检出率达84%~92%,l阳性率较其他方法提高30%~50%。

(4)铁苏木素染色法:i用显微镜检查阿米巴滋养体和包囊难以与非致病性阿米巴及其他类似细胞相鉴别时,l可以采用此法。经染色后的阿米巴,l核呈蓝黑色,l胞浆呈灰蓝色,l拟染色体呈深紫色,l核的细微结构明显可见。由于染色法操作费时,l对技术要求高,l一般不宜作为常规方法用于临床检验,l只有在鉴别困难或标本需长期保存时应用。

2.活组织检查 用乙状结肠镜或纤维结肠肠镜直接观察结肠黏膜溃疡,l在溃疡边缘钳取活组织或刮片直接涂片,l亦可作切片检查,l检出率最高达85%左右。在疑有阿米巴肝脓肿时,l可行肝穿刺抽取脓肿边缘样本检查滋养体。

3.体外培养法 由于待检标本中可能原虫数量太少难以找到时,l可将标本接种于人工培养基中,l经培养繁殖后检查。营养琼脂培养基用于临床诊断,l保种传代可选用鸡蛋血清培养基。培养标本应新鲜,l盛器洁净。本法比标准粪便涂片检查更敏感,l但对大多数实验室并不适用,l对慢性病倒的检出率不高。

【免疫学检查】

1.抗体检测111961年逐步建立的阿米巴无共生物培养,l为抗体检测提供了纯抗原。对于急性发病患者或疑有器官脓肿时有较高的辅助诊断价值,l也可用于流行病学调查人群血清抗体滴度情况。抗体检测方法有ELISA、i间接免疫荧光试验(IFA)和间接血凝试验(Indirect1haemagglutination1test,lIHA)等。ELISA法从血清标本中检测溶组织内阿米巴IgM抗体,l阳性率达90%以上,l此抗体通常在治疗成功后6周内消失。因此,l阳性结果几乎总是提示急性感染。IgG抗体存在于所有侵袭性阿米巴感染的患者中,l不能区别现症感染与既往感染。IHA测定血清滴度>1:i128时,l在肝脓肿和侵袭性肠阿米巴病时检测敏感性和特异性>85%,l可作为鉴别肠阿米巴病与一般炎症性肠病,l但不能鉴别肠道内侵袭性和非侵袭性感染,l阳性结果可持续1年左右。IFA特异性与敏感性均较高,l出现阳性时间早于IHA,l对肠阿米巴病的阳性率达50%~90%,l未见假阳性,l较IHA方法可靠,l但试验方法较繁琐。可用一般带菌培养的滋养体制成抗原片,l适宜于个例诊断。

2.抗原检测 应用单克隆抗体检测粪便、i脓液中虫源性抗原。对带滋养体者阳性率达100%;带包囊者为66.7%,l与其他肠道原虫的交叉阳性率仅为2.1%,l对健康者的假阳性率为2.7%。ELISA方法可从粪便标本中检测溶组织内阿米巴原虫抗原,l阳性率为77.5%,l与粪便检查阳性率相符,l对肝脓肿患者检出率高达95%~100%;侵袭性肠病患者达85%~95%,l但无症状带虫者仅为10%~40%。

【核酸检测】

DNA探针技术的应用为检测患者血液和排泄物中病原物质提供了高度特异、i敏感的检测工具,l且能用于虫种鉴定。

PCR方法可以通过扩增溶组织内阿米巴的DNA或rRNA检测粪便中的溶组织内阿米巴滋养体或包囊,l可以检出每克粪便中单个滋养体。最近有学者用溶组织内阿米巴种群复合体中致病与非致病虫种特异性引物,l从粪便中直接扩增阿米巴DNA获得成功。用2对引物作PCR扩增出2个虫种共有的0.55kb的DNA区带和0.35kb及0.15~0.2kb致病性与非致病性阿米巴特异性区带,l为本病诊断提供了全新的检测方法。

(三)诊断建议

1.肠阿米巴病11由于其症状轻重不一,l且缺少特征性,l故对慢性腹污或有肠道疾病者,l应考虑有本病可能;典型的痢疾样粘液血便,l中毒症状轻,l有反复发作倾向,l粪便镜检找到吞噬红细胞的溶组织内阿米巴滋养体,l可确诊为肠阿米巴病;部分患者粪便未发现病原体,l而临床上又不能排除本病时,l用血清学检查方法或在谨慎观察下诊断性治疗,l如有效可作出临床诊断。

2.肝阿米巴病11诊断依据包括:i①痢疾史和腹泻史;②长期发热且伴盗汗、i肝区痛和肝肿大伴压痛、i局部叩痛;③外周血白细胞计数增高,l血清学IgM检查有助于诊断;④影像检查显示肝脏有占位性病变;⑤脓肿穿刺液量较多,l大都呈棕褐色,l脓肿边缘组织中可找到阿米巴滋养体。

肠阿米巴病需与细菌性痢疾、i血吸虫、i肠结核、i结肠癌、i非特异性溃疡性结肠炎等进行鉴别诊断。肝阿米巴病要与细菌性肝脓肿,l原发性肝癌等相鉴别。