多数生殖器疱疹是由2型病毒引起，l但近年来1型病毒所致生殖器疱疹增多，l约占该病的10％～40％。两型病毒感染的预后有差别，l因此有必要在作病毒检测的同时进行病毒分型。生殖器疱疹的常用检验诊断技术包括细胞学、i微生物学、i免疫学和分子生物学诊断。检验诊断程序见图6-2。
【细胞学检测】
1.H-E染色将固定后的标本片置于Delafield’s苏术精原液中，l染10～20分钟(染5～10分钟后可取样镜检，l胞核着蓝色，l清晰可见即可)，l自来水洗去残留染料，l蒸馏水洗，l再用70％酸乙醇分色。最后用自来水蓝化(30分钟至数小时)，l蒸馏水洗，l滴加伊红。
2.Giemsa染色将玻片标本平放于支架上，l细胞面朝上，l每片滴加吉姆萨染液数滴覆盖标本，l30秒，l再加入2～3倍磷酸缓冲液(应用液)染色1分钟～3分钟，l倾去染液。
标本经用H-E或吉姆萨染色法染色后，l于光镜下观察可见感染细胞中出现胞浆空泡，l细胞融合成多核巨细胞，l可见细胞核内包涵体。光学显微镜检查法快速、i简便，l但敏感性较低，l应用范围较局限。
【病毒培养】
本试验为检测HSV感染的金标准。可采集患者唾液，l脊髓液及口腔、i宫颈、i阴道分泌物或角膜结膜刮取物等标本，l接种于易感细胞中培养1～2天，l出现细胞肿胀、i变圆、i相互融合等病变，l然后用免疫荧光法(IFA)、i酶联免疫吸附试验(ELISA)以及DNA限制性内切酶图谱、iDNA探针分子杂交技术等试验技术进行鉴定分型，l并确诊HSV感染。其中以水疱和脓疱分离病毒阳性率最高，l阳性率分别为94％和87％。
1.标本采集消毒棉签擦去官颈表面的黏液和碎屑，l用无菌一次性棉拭子在宫颈管或皮损处擦拭后，l浸人1ml含青霉素、i链霉素各11000U的9g／L氯化钠溶液中，l冷藏，l供病毒分离用。
2.方法取各种疑为单纯疱疹感染的患者标本液0.2ml接种原代乳兔肾单层细胞(或BHK细胞.Veto细胞、iHep-2细胞等。病毒初次分离时，l用原代乳兔肾细胞、i人胚肺细胞)，l37℃吸附1h后加入细胞维持液，l在50％CO2孵育箱中37℃培养，l逐日观察细胞病变。光镜下见细胞变圆、i变大并出现细胞融合现象为阳性。
3.注意事项正确的标本取材、i运输、i保存和接种，l避免细菌和真菌污染。
4.结果评价病毒培养法作为检测HSV的金标准，l但病
毒培养易受取材部位和发病时间的影响，l造成分离培养法检出率低；此外，l复发性生殖器疱疹患者标本中HSV滴度过低、i病毒活力弱或无活力，l因此易导致分离培养的假阴性。有研究显示112份标本进行分离培养法检测，l结果离培养法的检出率20.5％，l且感染以HSV-2为主。结果同时提示HSV感染与宫颈糜烂和宫颈癌密切相关。
【免疫学检测】
1.间接免疫荧光法检测单纯疱疹病毒(HSV)抗体如HSV-1／HSV-2生物薄片马赛克法，l本试验是一种非常敏感的抗HSV抗体初筛实验。适宜各种疑为单纯疱疹感染的患者。
检验结果评价：i间接免疫荧光法检测抗HSV-1抗体和抗HSV-2抗体。如果标本中抗HSV-2抗体阳性，l将在感染细胞胞浆中出现典型的荧光模型，l很少出现在细胞核中。但是，lHSV-1和HSV-2在免疫学和形态学上密切相关，l可能发生交叉反应。以HSV-1和HSV-2为基质检测同一份血清并比较其抗体滴度予以区别。
结果分析：iHSV原发感染后，l机体最先出现IgM，l随后出现IgA及IgG，l复发感染主要产生IgG，l抗体对阻止病毒扩散及限制病毒有一定作用，l但不能阻止复发。早期检测出IgM，l有利于诊断与治疗。但在复发时血清抗体滴度并不升高，l因此本实验多用于流行病学调查，l对诊断意义不大。
2.微孔板ELISA检测抗HSV-1抗体和抗HSV-2抗体本试验是抗HSV-1或HSV-2抗体的特异性确认实验。
3.HSV抗体印迹法本试验是区分抗HSV-1抗体和抗HSV-2抗体的特异性确认实验。在本实验中，l酶结合物为AP标记的抗人IgG或IgM抗体，l用以检测疱疹患者血清中相应抗HSV-1抗体或抗HSV-2抗体。
结果评价：i所有特异性抗原均包括在内并被清晰地分开。肉眼或用试剂公司自带EUROLineScan软件自动判断结果。
4.分子生物学方法AC-PCR法检测HSV-DNA
(1)标本采集：i用消毒棉签擦去宫颈表面的黏液和碎屑，l用无菌一次性棉拭子在官颈管或皮损处擦拭后，l浸入1ml含青霉素、i链霉素各11000U的9g／L氯化钠溶液中，l冷藏递送，l供病毒分离用。本试验适应各种疑为单纯疱疹感染的患者。
(2)试验方法：iHSV在HSV1DNA聚合酶基因保守序列区设计3个引物，l即HSV-1／HSV-2型共同性上游引物及HSV-1和HSV-2型特异性下游引物，lHSV-1和HSV-2的DNA扩增片段长度分别为477bp和399bp。用抗HSV型共同性糖蛋白单克隆抗体捕获HSV后，l进行PCR扩增和检测。
(3)结果评价：iPCR方法具有敏感性高、i检验快速等的优点，l但由于标本易受污染，l尤其对病毒含量步、i成分复杂的妇女生殖道标本，l处理困难，l易造成假阳性或假阴性结果。AC-PCR方法对标本有洁净作用，l可大大降低无关核酸的污染和清除抑制物，l并具有捕捉和富集标本中病原体的作用，l可大幅度提高检测的特异性和敏感性。
【检验诊断综合评价】
2／31HSV感染者为无症状排毒状态，l必须借助实验诊断。生殖器疱疹病毒的检验诊断包括病毒的分离、i鉴定、i抗原检出以及细胞学等方法。其中病毒的分离鉴定为金标准，l其中以水泡、i脓疱检出率为最高.分别可达94％、i87％，l可作为确诊依据，l且可用于HSV的分型。HSV较易分离培养。采集水疱液、i阴道拭子等标本接种于人胚肾等易感细胞，l出现相应病变，l然后用免疫荧光标记的HSV-1或HSV-2单克隆抗体进行鉴定，l容易诊断。此外，l用免疫荧光或单克隆抗体染色用于疱疹皮损内特异性抗原的检出以及原位核酸杂交或PCR等分子生物学方法检测标本中HSV-DNA，l方法快速、i敏感特异。
近年来报道的间接免疫荧光法等方法检测血清中的HSV-Ab，l并用于HSV的分型。但是，l血清抗体检测主要用于流行病学调查和原发性感染的回顾性诊断，l对于恢复期或复发性感染意义不大，l且各种检测试剂重量差异较大。而细胞学检查，l即从疱底或溃疡面刮取少量组织作涂片，lGiemsa染色可检出HSV感染具特征性的多核巨细胞内的嗜酸性包涵体。但不能区别HSV感染或水痘一带状疱疹病毒感染。敏感度仅50％～60％，l诊断价值有限。而其它试验一般作为病原学检测的完善和补充。