诊断表原体感染的常规方法有3种，l即细胞学检查、i血清学检查和衣原体的分离培养。有条件时还可检出病原体特异性DNA协助本病的诊断。近年来基因诊断技术在CT诊断方面的成功应用，l使过去认为难以诊断的疾患已提高到最易诊断的一种疾患，l但是由于上述技术本身的特殊性，l以及对操作人员、i实验设备等的要求极为严格，l在一般医院实行起来尚有一定难度。一般常用CT抗原检出等方法协助诊断。
性病肉芽肿主要根据接触史(有不洁性交史)和临床表现(在生殖器部位出现过表浅糜烂与溃疡)。接触传染源后1～4周后出现两侧腹股沟淋巴结炎，l有槽沟及喷水壶状多数瘘管，l结合实验室检查确诊。此外，l组织病理检查可协助诊断。衣原体感染检验诊断程序见图8-2。
【微生物学检测】
1.衣原体细胞培养
(1)标本采集：i对女性患者，l一般取宫颈管标本。方法是先用一根长棉签拭擦去宫颈表面黏液，l弃去；再用另一根长棉签拭插人宫颈管1～2cm处，l捻转数周，l停留10～30秒后取出送检。对男性患者可取尿道、i直肠或肿大的淋巴结穿刺液作细胞培养的材料。早期曾试图用尿标本做培养，l但阳性率甚低，l故只能采用尿道或宫颈拭子。对于新生儿眼炎或肺炎，l也可取结膜刮片标本及痰液、i支气管肺泡灌洗液等。作沙眼衣原体培养检查时，l拭子标本需放入标本运送液中，l-80℃低温冰箱保存待检。
(2)实验方法：i由于CT的专性细胞寄生性，l一般培养法不能使其生长，l只有在活的细胞内才能增殖、i复制。将采得的标本以1：i10充分稀释，l以避免标本中的毒性物质对敏感细胞的毒性，l并经常规抗生素预处理。
1)组织细胞培养法：i多采用McCoy细胞或Hela-229细胞(国内也有报道采用Hep-2细胞)或BHK等敏感单层细胞。在接种标本前，l以X线照射细胞，l或于细胞培养中加人代谢抑制物如细胞松弛素B、iDEAE葡聚糖，l其目的在于使细胞生长代谢缓慢，l以利于衣原体的寄生性生长。经培养后用用单克隆免疫荧光抗体染色，l在显微镜下观察细胞内有无包涵体。
2)实验性动物感染；人类是沙眼衣原体的自然宿主.主要寄生于机体黏膜上皮细胞。猴和猩猩的眼及泌尿系可实验感染各型沙眼衣原体(包括LGV在内)，l所有沙眼衣原体都能在鸡胚卵黄囊内生长繁殖。
(3)方法学评价：i培养法的特异性为100％，l但敏感性一般低于100％，l且各个实验室操作步骤有所不同，l没有标准化，l这可能有助于解释对同一种非培养方法的不同评价。组织细胞培养法是诊断CT感染的金标准，l但是由于分离培养操作复杂，l技术及设备要求高，l所需时间长，l且敏感性受标本采集、i运送、i保存等的影响较大，l加上国内很多医院不具备细胞培养条件，l因而不适于临床应用，l多用于科研和疑难病例的终鉴定。
2.衣原体细胞学检查法
(1)标本采集：i各种疑为沙眼衣原体感染部位的标本，l包括尿道、i宫颈、i前列腺液，l尿沉渣等标本均可作为检材。
(2)实验方法
1)光学显微镜检查：i根据不同的发病对象及病期采集不同的标本涂片，l用姬姆萨染色，lMoCoy细胞中见衣原体始体(彩图8-3)，lEB被染成红色，lRB被染成蓝紫色，l胞浆内包涵体被染成紫红色，l斯坦帕(Stamp)染色(背景呈淡绿色，l衣原体被染成鲜红色)、i碘染色(Rice)法(在低倍显微镜下观察，l沙眼衣原体的包涵体因含有糖原呈棕褐色，l鹦鹉热衣原体的包涵体不含糖原不着色)。11，l
2)电子显微镜观察；将标本处理后在电子显微镜下一般可见到两大颗粒：i一类为EB，l呈圆形或卵圆形颗粒，l中央核心部分电子密度大；另一类为RB，l颗粒的电子密度低，l形状不规则。除上述两大类颗粒之外，l有时尚可见到介于二者之间的中间体(IB)。
(3)方法学评价：i直接光学显微镜检查是一种简便、i价廉的诊断方法。可用于新生儿眼结膜刮片的检查。但因其敏感性和特异性均极低，l不适宜用于泌尿生殖道沙服衣原体感染的诊断。电子显微镜观察方法，l由于其对取材目的物质的浓度要求较高，l且制作电镜观察标本周期偏长(约3～71日不等)，l技术要求复杂.设备昴贵等因素，l亦限制了该技术在临床检验中的应用.目前多用于科研或仅用于难以确诊疾病的诊断。
【免疫学检测】
近年来采用荧光素标记的抗衣原体单克隆抗体，l来检测细胞涂片中的衣原体，l使用较为方便，l目前主要用衣原体外膜蛋白(MOMP)的单克隆抗体的商品试剂(Mieo1Trak，lPath-finder，lMonofluor)。
1.衣原体荧光标记单克隆抗体试验又可以分为直接法和间接法。目前有两类试剂盒用于衣原体的实验室诊断。分别采用免疫荧光标记抗体和快速法免疫试验直接从患者标本中检出衣原体的抗原试验。
方法学评价：i此法诊断沙眼衣原体感染的敏感性为70％～90％，l特异性为83％～99％。由于有可能将某些发光颗粒(白细胞、i上皮细胞、i色素颗粒)、i细菌和酵母菌误认为沙眼衣
原体，l因此此法对于实验人员的技术水平要求较高。直接免疫荧光法的优点是：i快速，l价廉，l操作简便，l标本的贮存和运送方便，l标本中的沙眼衣原体不必是存活的或是有感染性的。由于已经有商品化的试剂盒供应，l因而方便了使用。缺点是在低感染率的人群中敏感性差，l受实验人员的主观影响大。它最适宜用来检测沙跟衣原体高流行率人群(如性病门诊患者)。
2.衣原体抗原免疫快速法(C-C快速法)衣原体免疫快速法被称为第二代免疫试验法。敏感性与特异性与酶联法相似，l特点是操作简单，l报告快捷，l可单一标本检测，l无需特殊设备，l任何实验室都能做。取待测标本加缓冲液后加热至80℃左右，l使衣原体细胞表面磷酸脂多糖(LPS)释放，l滴加带色乳胶标记的鼠抗衣原体LPS抗体作用15分钟后，l阳性时见蓝色原体LPS-鼠抗LPS抗体带。
方法学评价：iCC法检测衣原体阳性率普遍偏低，l其原因是多方面的，l除去实验操作影响，l其中①衣原体是寄生在上皮细胞内.采样若没采到上皮细胞，l势必造成假阴性；②抗原提取不彻底(只有破坏衣原体细胞壁，l其LPS才溶出)，l或抗原被破坏(LPS182℃分解破坏)，l也可造成假阴性；③试剂盒生产所用的单抗相应的衣原体血清型可能存在地区差异或变异。有学者在临床工作中发现，l某同一批号衣原体试剂在有些地区(并不一定是性病高发区)的阳性率比较接近厂家标示的水平，l而在另外一些地区(有些还是性病高发区)的阳性率则远远低于厂家标示的水平；④试剂本身灵敏度低。
【分子生物学检测】
1.PCR检测衣原体DNA
(1)标本的处理：i①女性取材部位为子宫颈管，l男性为尿道，l将灭菌棉拭子深入宫颈管或尿道1cm左右(分男、i女专用两种)，l转动数圈，l停留约30秒，l取出后置标本缓冲液中；②原体DNA提取；将宫颈管内或尿道内刮取物置含0.5％NP-40、i0.5％Tween120，l1％SDS和2mg／ml蛋白酶K的TES缓冲液(50mmal／L1Tris-HC1，l50mmol／L1NaC1，l100mmol／L1EDTA，lpH18.0)置37℃裂解60分钟，l沸水5分钟，l酚、i氯仿抽提DNA，l乙醇沉淀，l沉淀物溶于20μl1TE缓冲液
100mmol／L1Tris-HC1，l1mmol／L1EDTA，lpH18.0)。
(2)引物设计：i引物对选自衣原体16SrRNA基因，l为衣原体属特异性保守基因组，l以DNA合成仪固相亚磷酸三酯合成并纯化。
(3)PCR扩增。
(4)扩增产物的检测：i1.5％琼脂糖凝胶电泳检测：i取10μl1PCR扩增物作1.5％琼脂糖凝胶电泳、i0.5μg／ml溴化乙锭染色，l以PGEM-3Zf(+)DNA-Hate1Ⅲ为分子量标准，l置紫外透射仪观察结果。
LCR法也巳用来检测沙眼衣原体感染。如，l以沙眼衣原体隐蔽性质粒顺序为引物，l利用LCR法检测718份尿液标本的沙眼衣原体，l并与细胞培养法相比较。两者结果不一致时，l再用DFA和另一种LCR(以沙眼衣原体主要外膜蛋白基因顺序为引物)加以验证。这样，l观察到LCR的敏感性和特异性分别为94.5％和99.5％；阳性预期值和阴性预期值分别是97.5％和98.8％.而细胞培养的敏感性只有57.1％。LCR与PCR法均能一致扩增沙眼衣原体的DNA数量达3个衣原体水平。
2.生物素寡核苷酸探针的检测
方法学评价：iPCR方法用来诊断泌尿生殖道沙眼衣原体感染的敏感性高，l在细胞培养阴性者亦能检测出沙眼衣原体感染。
沙眼衣原体核酸扩增技术的另一进展是可用清晨首次尿(或禁尿4小时后的首次尿)作为标本。据报告，l男性尿液标本以PCR或LCR作沙眼衣原体检测，l敏感性为93.5％～100％，l特异性为99.1％～100％，l而尿道拭子培养的敏感性平均为68.2％。女性尿液标本以LCR检测沙眼衣原体的敏感性为95.7％，l特异性为100％，l而宫颈管拭子培养的敏感性为59.6％。由于尿液取材方便，l对患者无侵害，l因此这种方法适合于在不同人群中进行大规模筛查，l也适合于边远地区标本采集后运送至中心实验室进行检测。
PCR实验在操作时，l尤其要避免外界污染及残留污染，l以免发生假阳性。PCR的开展需要一定的实验条件.实验人员需具备较为熟练的分子生物学操作技术。最好在实验条件较为成熟的实验室开展。
【检验诊断综合评价】
生殖器衣原体感染的检验诊断中以细胞胞培养为衣原体感染诊断的“金标准”，l常用McCoy和HeLa229细胞，l敏感性为80％～90％。除了细胞培养用于个中标本病原学检查之外，l荧光素标记的抗衣原体单克隆抗体试验用于检测衣原体抗原或PCR以及核酸杂交检测衣原体DNA等方法均适用于精液、i宫颈刮片或其他病灶部分活检标本以及初段尿离心后涂片的快速、i特异性诊断。而另外一些试验则作为上述试验的完善和补充。
【注意事项】
在做衣原体培养时应注意标本的保存并及时接种到培养细胞中。采集的标本可加人含抗生素的蔗静磷酸盐谷氨酸盐(SPG)的运送培养基，l置-80℃冰箱或液氮保存。若标本在24小时内接种.检出阳性率最高。