TORCH感染的检验诊断

1971年,lNahmias将数种能引起胎儿宫内感染,l甚至造成先天缺陷或发育异常的病原体英文名称的首字母组合而成TORCH,l即弓形虫(toxoplasma1gondii,lTOX)、i风疹病毒(rubella1virus,lRUV)、i巨细胞病毒(cytomegalovirus,lCMV)、i单纯疱疹病毒Ⅰ和Ⅱ(herpes1simplex1virus11and1Ⅱ,lHSV-Ⅰ、iⅡ)、i其他(others)主要指梅毒螺旋体。这组病原体经胎盘感染胎儿,l可造成流产、i早产、i先天畸形及引起多系统损害,l特别是神经系统的损害,l临床上称为TORCH综合征,l又称“TORCH”感染。TORCH感染的特点是孕妇感染后自身症状轻微,l多数无明显症状,l但孕妇感染后所产生的后果严重,l且目前尚无有效的治疗方法,l因此对于孕妇感染的监测显得非常重要。一般分两步进行:i①孕前筛查,l育龄夫妇在孕前进行TORCH病原体的常规筛查,l如阳性者应给予及时的治疗,l并推迟受孕时间;②产前诊断,l如孕妇血清特异性抗体阳性者,l应采取羊水、i脐血或绒毛组织进行相应病原体检测,l结合B型超声了解胎儿有无发育畸形,l结合胎盘病理检查综合分析。TORCH病原体感染的胎盘肉眼观偶有体积增大或水肿样改变,l镜检主要为轻度灶性或重度弥散性、i坏死性绒毛炎和绒毛干血管的坏死性动脉炎以及绒毛成熟障碍。经产前诊断确定胎儿已受到感染尤其是孕早期感染者最好终止妊娠.

一、i弓形虫感染

多数孕妇感染弓形虫(TOX)后无症状,l部分病例急性期表现为乏力、i咽痛、i肌肉酸痛及淋巴结肿大。临床上要结合可能被感染的时间、i感染时的孕龄、i孕妇的临床表现、i既往有无不良分娩史等综合判断。对弓形虫的检验诊断是主要的确诊依据。

【一般检验项目】

白细胞计数:i白细胞升高不是弓形虫感染的特异指标,l但部分弓形虫感染患者外周瓶液白细胞可升高。

【特殊检验项目】

1.病原学诊断主要检查弓形虫滋养体。

(1)检测方法;体液标本21500r/min离心10分钟,l取沉淀物制成涂片,l若组织标本可直接涂抹在玻片上或制成压印标本,l用甲醇或乙醇加等量乙醚固定,l再用Giemas染液染色,l染色后直接在显微镜下检查。

(2)标本:i脑脊液、i羊水、i血液、i尿液、i阴道分泌物、i组织标本等。

(3)临床诊断意义及评价:i

1)在体液涂片或组织切片中发现弓形虫新月形滋养体,l即可确诊弓形虫急性感染。

2)在组织切片中发现弓形虫包囊,l不能确诊弓形虫急性感染,l应结合临床表现及其他检测作具体分析。

3)有些寄生虫、i微生物、i原虫等与弓形虫相似,l注意加以鉴别。

2.血清TOX抗体(IgM、iIgG)检测根据抗体的有无和多少、i抗体的种类,l对大部分TOX患者可明确诊断。

(1)检测方法;免疫金层析法、i酶联免疫法、i时间分辨免疫荧光法等。

(2)标本:i孕妇血清,l胎儿脐血。

(3)参考范围:i阴性。

(4)临床诊断意义及评价:i

1)血清TOX-IgG抗体阴性的孕妇是易感人群。怀疑孕妇感染弓形虫病,l应及时检查血清中TOX-IgM抗体。首次检测时间为孕10~12周,l阴性者需20~22周再次复查。

2)若孕妇血清TOX-IgM抗体阳性,l提示为原发急性感染。

3)脐血TOX-IgM抗体阳性提示新生儿已发生宫内弓形虫感染,l但要注意排除采集脐血时的母血污染。同时检测脐血和母血TOX特异性的lgM和Ig0抗体有助于诊断。

二、i风疹病毒感染

风疹病毒(RUV)是单链RNA病毒,l首先侵人呼吸道黏膜和颈淋巴结,l在局部复制,l随后进入血循环引起病毒血症,l病毒通过白细胞到达单核巨噬细胞系统,l复制后再次进入血循环引起第二次病毒血症。孕妇被RUV感染后症状一般比较轻微,l仅经数天后即自行消退,l因此往往容易被忽略,l但对宫内的胚胎和胎儿却产生很大的影响。感染越早,l胎儿发生畸形率越高、i越严重。风疹病毒感染的临床表现并无特色,l确诊需依赖实验室检查。

【一般检验项目】

白细胞计数:i白细胞升高不是风疹病毒感染的特异指标,l但部分风疹病毒感染患者血液白细胞数可升高。

【特殊检验项目】

1.病毒分离

(1)检测方法:i取出疹前4天至出疹后5天的病人鼻咽部分泌物,l或先天性风疹综合征患儿的脑脊液、i尿液、i羊水等培养于RKl3、iVero或BHK21等传代细胞,l可分离出RUV,l再进行病毒的鉴定。

(2)标本:i羊水、i血液、i脑脊液、i咽拭子、i组织标本等。

(3)临床诊断意义及评价:i标本中分离出风疹病毒可以确诊有RUV感染。

2.血清学RUV抗体(IgM、iIgG)检测

(1)检测方法:iELISA法。

(2)标本:i血清、i脑脊液等。

(3)临床诊断意义及评价:i

1)血清RUV-IgG抗体阴性的孕妇是易感人群。婚前检查妇女血清RUV抗体为阴性时,l应注射RUV疫苗,l使其体内产生抗体,l注射后至少避孕3个月,l然后苒怀孕一般可避免感染RUV。

2)血清RUV-IgM抗体阳性,l提示有RUV感染。血清RUV-IgG抗体阳性提示既往感染有RUV,l患者有免疫力,l不会再受RUV感染。

三、i巨细胞病毒感染

巨细胞病毒(CMV)为双链DNA病毒,l普遍存在于人体中,l从怀孕早期到后期,l孕妇都可以被CMV感染。成人受感染后,l临床症状不明显,l或有轻微类似上呼吸道感染症状,l如发烧不适、i皮疹、i淋巴结肿大等。CMV感染后可从尿液、i唾液、i宫颈分泌物、i泪水和乳汁中排出,l可通过胎盘垂直传播给胎儿。严重新生儿感染易与新生儿败血症、i脑膜脑炎、i弓形虫病等相混淆,l确诊需依赖实验室检查。

【一般检验项目】

1.血常规检查正常成人感染CMV后多表现为隐性感染,l或可引起单核细胞增多、i淋巴细胞相对或绝对增多、i可见异常淋巴细胞等。CMV感染重症者血小板减少、i淋巴细胞增多并有大量异常淋巴细胞、i红细胞增多。

2.肝功能检查CMV感染重症者出现黄疸、i肝脾肿大等肝功能损害。

【特殊检验项目】

1病原学诊断

(1)检测方法:i体液标本21500r/min离心10分钟,l取沉淀物制成涂片,l如其他脏器的组织标本按常规包埋、i切片处理。用Giemas染液染色,l染色后直接在显微镜下检查。

(2)标本:i血液、i尿液、i脑脊液、i羊水、i组织标本等。

(3)临床诊断意义及评价:i

1)CMV侵犯细胞后,l细胞先是收缩,l以后即变圆,l逐渐增大,l直径可达40μm,l受染细胞的包浆内有嗜酸性包涵体,l核内有嗜酸性或嗜碱性包涵体,l核包涵体很大,l横径可达15μm,l周围有一不染色的环状透明带与核膜分开,l呈“猫头鹰眼睛”的特殊形态,l易与正常细胞区别。若镜下检到“猫头鹰眼睛”形态的细胞有诊断意义。

2)新生儿有症状者难与弓形虫、i风疹、i疱疹病毒感染区别,l确诊有赖于从患儿尿液中(出生第一周)分离出病毒。若为产道感染,l至少于生后2周才能从新生儿尿液中检出CMV病毒包涵体。

2.血清CMV抗体(IgM、iIgG)检测

(1)检测方法:iELISA法、i间接免疫荧光法等。

(2)标本:i血清。

(3)正常参考范围:i阴性。

(4)临床诊断意义及评价:i患者和隐性感染者为传染源,l病毒从尿液、i唾液、i宫颈分泌物、i精液、i泪水水和乳汁中排出。CMV可通过胎盘传染给胎儿。人群普遍易感,l年龄越小,l易感性越高。妊娠前6个月感染危害性最大。血清CMV-IgM抗体阳性,l剥早期诊断CMV有重要意义。新生儿及脐血中检测到CMV-IgM抗体是渗断胎儿先天感染的主要依据之一。孕妇血清CMV-IgM抗体是近期原发感染CMV的重要指标。

四、i单纯疱疹病毒感染

单纯疱疹病毒(HSV)主要分Ⅰ型和Ⅱ型,l一般认为Ⅰ型主要感染腰以上部位,l如扁桃体炎、i角结膜炎及口唇疱疹等。Ⅱ型常感染腰以下部位,l引起生殖器疱疹等。HSV-Ⅱ型对新生儿危害很大。实验室诊断主要包括扶病变标本中分离出HSV病毒和血清学检查等。

【特殊检验项目】

1.病毒培养和分型

(1)检测方法:i癌疹病毒组织培养,l用人胚成纤维细胞、i人羊膜细胞、i肾细胞等作病毒分离培养,l用免疫荧光法进行鉴定。

(2)标本:i水疱液、i唾液、i生殖道分泌物、i羊水、i组织标本等。

(3)正常参考范围:i阴性。

(4)临床诊断意义及评价:i标本中分离出单纯疱疹病毒可以确诊有HSV感染。

(5)方法学评价及问题;病毒培养时间长,l一般2~4天,l可长达14天。用免疫荧光法进行鉴定,l可以确诊,l但操作复杂,l费用昂贵。且多种因素可影响HSV分离培养的成功率。①采集的标本中是否含有活病毒;②正确的标本取材、i运输、i保存和接种;③细菌和真菌污染;④标本的来源部位和疾病的病程影响病毒分离培养的敏感性,l病损的不同阶段,l分离出病毒的可能性不同,l如果病损已结痂,l分离到HSV的可能性较病损处于囊泡或溃疡期低。

2.电子显微镜直接镜检从完整的囊泡液吸取囊液,l电子显微镜下鉴别病毒颗粒,l但其敏感性低,l不到病毒分离培养法的10%,l而且不能与其他疱疹病毒相区别。

3.细胞学检查从疱底或溃疡面刮取少量组织作涂片,lWright-Giemsa染色或Papanicolaou染色,l可检出HSV感染具特征性的多核巨细胞内的嗜酸性包涵体,l但不能区别HSV感染或水痘-带状疱疹病毒感染,l其敏感性仅为病毒分离的60%。

4.血清HSV抗体(IgM、iIgG)检测

(1)检测方法:iELISA法等。

(2)标本:i血清、i水疱液等。

(3)参考范围:iHSV-IgM阴性;HSV-IgG<1:i512。

(4)临床诊断意义及评价:i

1)HSV-IgG和IgM抗体均为阴性,l提示未曾受过单纯疱疹病毒感染。

2)HSV-IgG抗体滴度<1:i512,lIgM抗体为阴性,l提示可能有既往感染史。

3)HSV-IgG和IgM抗体均为阳性,l或者是IgG抗体滴度≥1:i512,l表明有HSV近期感染;如果HSV-IgG抗体滴度在双份血清中有4倍以上升高,l那么无论IgM抗体是否为阳性,l都是HSV近期感染的指标。

5.PCR检测病毒DNA1PCR检测HSV病毒的DNA,l其敏感性和特异性高,l能大大提高生殖器溃疡病人中HSV确诊的能力,l但费用昂贵,l且受操作技术和实验室条件及设备的影响,l容易出现假阳性,l故用于临床诊断其准确性受一定影响。

【应用建议】

孕妇TORCH感染后所产生的后果严重,l临床通过必要的检验诊断手段对于孕妇感染的监测非常重要,l一般包括孕前筛查和产前诊断两步。临床最常用也是首选的检验筛查手段是采用免疫学方法检测相应TORCH病原体的特异性IgM和IgG抗体。也可通过病原体培养、i分子生物学手段等进行相应病原体的检测,l但需要较严格的实验条件和技术保障,l一般的临床实验室难以常规开展。产前诊断最常用羊水或脐血中检测到相应TORCH病原体的特异性IgM抗体,l作为诊断胎儿先天感染的主要依据之一。