利用多重逆转录聚合酶链反应(mRT-PCR)方法，l通过多组引物设计一次检测多种呼吸道病毒核酸，l为检测病毒核酸相关序列的存在.提供了病毒直接感染的诊断依据。

(一)实验操作

取患儿鼻咽分泌物标本用Hank’s液吹打混匀、i离心，l吸取上清提取病毒核酸，l作mRT-PCR，lPCR产物经琼脂糖凝胶电泳分离条带，l并于紫外灯下观察结果。不同呼吸道病毒mRT-PCR产物电泳后，l其DNA条带的位置明显不同，l清晰可见，l易于区分。根据DNA条带的位置，l可以准确地鉴定病毒混合液中病毒的种类、i型和亚型。

(二)方法学评价

mRT-PCR可以直接检测采集的临床标本，l因为病毒RNA逆转录后，l经PCR循环，l目标基因扩增了107～1011倍，l从而提高了阳性检出率。mRT-PCR是一种敏感、i特异、i快速的方法，l并能使某些不能培养或难于培养的病毒得以检测，l但PCR法不能区别有感染力的病毒和死病毒，l因为只要标本中存在病毒的特异性核酸，lPCR就能对其扩增，l容易出现假阳性，l因此该实验有一定局限性。

在呼吸道病毒感染的流行季节，l根据患儿的发病年龄及临床症状，l利用实验室检查以确定特异性病原，l对于合理用药，l及时隔离患儿，l防止病毒播散都有极其重要的意义。