(一)血标本的采集和送检
送检血液标本有助于识别由细菌、i真菌引起的菌血症、i脓毒血症、i心内膜炎及人工瓣膜感染、i化脓性血栓性静脉炎、i以及其他感染或导管引起的感染。现在较少作手工血培养，l大量先进的自动化血液培养系统可靠而快捷。
采集血标本应该在使用抗生素之前、i发热高峰后立即采血。成人每次穿刺应采血20～30ml，l对于儿童的采血量则相对可以步一些。最好血与肉汤的比例以1：i5～1：i10更有利于检出细菌，l大多数商业血培养系统都规定了必要的血标本量，l也规定了培养不同微生物所使用的培养瓶。
采血前患者局部必须进行消毒，l用2％碘酒和75％乙醇消毒血培养瓶橡胶瓶塞，l更换针头将抽出的血液注入瓶内摇匀。如不能立即送检，l也应保存在室温2S℃，l最好不超过两小时。厌氧菌菌血症约占菌血症的5％～15％，l所以最好同时做一份厌氧血培养。单一采集的血培养标本可能被污染，l特别对于凝固酶阴性的葡萄球菌、i棒状杆菌、iviridaas链球菌、i以及布氏杆菌要考虑其污染的可能性。而要检出具有代表性的病原体则往往要在两个以上部位采集两份以上的血作培养。在24小时内采血部位不得多于4个以上。
(二)一般标本采集
1.尿标本的采集11留取中段尿，l最好为清晨的第一次小便，l外阴用硼酸清洗后，l留中段尿送检。因其简便易行，l是目前最常用的留尿方法；导管导尿，l有带人细菌的危险，l一般尽量不用；耻骨上膀肮穿刺，l因其在完全无菌条件下进行，l结果可靠，l对中段尿或导尿结果可疑者可采用；小要儿可用消毒塑料袋固定在外阴部留尿，l但如30分钟未留到尿，l需再次消毒，l尿标本易被污染。
所有的尿标本都要及时送往实验室，l并且要在采集后的2小时内处理好。如果不能及时送检，l可将标本冷藏，l最多不超过24小时。
定量培养可以区分非侵人手段采集尿标本(如中段尿)所带来的污染以及尿路感染，l最初培养苗落计数>105CFU／ml则高度提示有感染，l但是此标准针对不同情况下作了修改。对于婴幼儿和儿童、i男性病人、i有尿道插管的病人、i最近进行了抗生素治疗的、i刚喝了大量水的、i有症状并伴随有脓尿的患者、i有尿路梗阻者、i或者患有血源性肾盂肾炎者，l真正尿路感染时其菌落计数可能不到105CFU／ml，l值得注意。尿标本的定量培养通常是用标定好的塑料的或金属丝的接种环取一定量的标本接种于培养基。接种环要垂直插人充分混匀的标本中，l小心取出满环的尿标本从上向下垂直划一直线，l再垂直于此线从上朝下来回向两边划开，l并旋转60°及120°均匀涂开。培养于35℃，l5％～70％CO2环境。
有时由于抗生素的作用，l细菌产生变异，l细胞膜破裂，l不能保持原有状态，l但在肾脏髓质高渗环境中仍可继续生存，l此时普通尿培养，l细菌无法生长，l故对慢性肾盂肾炎经治疗临床症状不见好转，l而尿培养反复阴性者，l应同时作高渗培养，l明确病原，l如停药过早，l细菌恢复原状仍可致病。
高倍镜下镜检尿标本，l每视野中有1个以上的细菌就相当于培养菌落计数有>105CFU／ml，l其相关性很好。
2.大便和肛拭子11可用于引起感染性腹泻或食物中毒的病原学诊断。消毒棉签采取粪便的异常部分于蜡纸盒内或试管内，l也可用肠拭子沾等渗盐水，l由肛门插入直肠4、i5cm处，l轻轻转动，l取出粪便少许，l插入含有改良Stuart’s培养基的试管中，l1小时内送检。标本不能被尿液、i钡餐和卫生纸污染。
3.咽拭子 拭子取出沾无菌生理盐水(必要时以压舌板轻压舌部)，l嘱病人发“啊”音，l以轻快的动作，l迅速擦拭两侧腭弓及咽、i扁桃体的分泌物后，l速将试管口在酒精灯火烙上消毒,1将拭于插入含有改良Stuart，ls培养基的试管中立即送检，l如果不能及时送检就应暂时冷藏。真菌培养标本，l须在口腔溃疡面上采取分泌物。咽拭于标本通常大多数都用于诊断A群链球菌咽炎。现在有许多用于快速检测A群链球菌的商品试剂，l阳性率不定。
4.下呼吸道标本 送检的下呼吸道标本，l主要是用于确定肺炎病因。最普通的呼吸道标本是痰，l包括咳出的和诱导出的。一般取清晨痰，l因为量多，l含苗量亦大，l嘱病人先用朵贝氏液，l再用清水漱口，l以除去口腔中细菌，l深吸气后用力咳出1、i2口痰于培养皿或瓶中。呼吸道标本还有气管吸出物、i支气管刷取物、i支气管灌洗液和支气管肺泡灌洗液。下呼吸道标本应该立即送往实验室，l如果不能及时送检或及时处理，l标本应该冷藏。
通常情况下，l咳出的痰和气管吸出物，l在处理之前都要作细胞分析、i筛选，l确定是下呼吸道的分泌物还是唾液。此步骤是取标本的脓性部分，l作一张革兰染色涂片，l在低倍镜下确定鳞状上皮细胞和(或)中性粒细胞的数目，l可以评估标本的质量。有一种简单的筛选方法，l只包括了对鳞状上皮细胞的评估，l每低倍视野中的鳞状上皮细胞>10时，l表明该标本被唾液污染，l不能用于作培养。
对于所有合格的下呼吸道标本都应该涂片作革兰染色，l在油镜下观察有关的细菌的数目。任何细胞内的细菌都应报告。对于要作培养的，l建议选择性培养基和非选择性培养基都用。此外还要接种一种用于分离嗜血杆菌的培养基。培养条件为35℃，l含有5％CO2的环境。
5.伤口和脓肿标本 化脓性标本理论上应该用注射器抽吸采集，l再移入无菌容器内，l立即送往实验室，l但如果无法得到抽吸物，l也可以用拭子在伤口深部采集渗出物，l起码要采集2份拭子标本，l一份用于培养，l另一份用于涂片染色。注意对皮肤或黏膜进行严格消毒，l其所有标本都要用含有改良的Stuar's培养基的运送试管送检。如果不能及时送检，l应将标本放在冰箱中冷藏。
6.胆汁标奉的采集 用十二指肠管抽取胆汁A，lB，lC，lD各1～3ml，l分别置于无菌容器中，l立即送检。
7.耳部位标本 实验室收到的耳部位标本一般有两种，l即用于诊断耳炎的拭子和用于诊断中耳炎的外耳、i中耳液体。这两个部位潜在感染的细菌有所不同。铜绿假单胞菌常常引起外耳炎，l也会有其他细菌，l但不会有厌氧菌，l所以没有必要作厌氧菌培养。来自于呼吸道的菌群，l包括肺炎链球菌、i流感嗜血杆菌、i卡他奠拉菌以及金黄色葡萄球菌和革兰阴性杆菌都可能引起中耳炎，l厌氧菌也可引起中耳感染，l是否作厌氧菌的培养要根据临床要求。
8.眼部标本 有几种眼部感染的标本可采集用于微生物学检验，l包括用拭子或无菌刮勺采取的结膜标本，l用以诊断结膜炎，l用刮勺刮取的角膜标本用以诊断角膜炎，l玻璃体液用以诊断眼内炎；化脓性标本用以诊断蜂窝织炎；由于许多情况下，l眼睛感染所获取的标本量很少，l所以建议作床旁接种和涂片。
涂片直接检查对于快速诊断跟部感染很重要，l直接检查包括革兰染色查细菌。结膜刮取物作Giemsa染色可检查上皮细胞是否有嗜碱性的胞质内包涵体。眼部标本常规细菌培养所用的培养基，l应该包括有能够检出肺炎链球菌、i流感嗜血杆菌和淋病奈瑟菌的营养加强的培养基，l选择性培养基应放在有CO2的环境中培养。
(三)无菌体液
1.脑脊液 脑脊掖通常是经腰椎穿刺采集。每份细菌学检验至少需要0.5ml脑脊液，l当然量多一点会更好。标本应该立即送往实验室并尽快处理。如果不能及时送检，l标本应置于室温下。如果采集的脑脊液多于1.0ml，l应该离心至少11500rpm1l5min.上精液倾人无菌试管中，l留取0.5ml的沉淀和液体，l充分混匀，l涂片镜检和接种平板培养基作培养。在实验室所有的脑脊液标本最好都作革兰染色。快速方法可检测标本中的一些细菌的抗原，l如B群链球菌、i肺炎链球菌、i一些脑膜炎奈瑟菌的血清型、i大肠埃希菌(K1囊抗原与脑膜炎奈瑟菌B型的有交叉反应)，l标本离心的上清液或原始标本中，l可检测到流感嗜血杆菌b型的抗原-
2.其他体液包括心包液、i胸水、i腹水和滑液。对其用于微生物检验的送检标本最好是液体，l而不是拭子。量以1～5ml为宜。对于非卧床透析患者的腹膜炎诊断，l要采集最少50ml标本。体液应直接接种于血培养瓶或者在床旁收集于无菌、i厌氧容器中，l并立即送到实验室。
在实验室，l1ml以上的标本应该至少以11500rpm离心15min。弃掉上清液，l留取约0.5ml沉淀，l混匀，l涂片作革兰染色并接种于培养基中。未离心标本也可在实验室直接接种于血培养瓶中，l留取少量(0.5～1.0ml)作革兰染色。培养应该在有CO2的环境中，l35℃培养。
(四)厌氧菌标本的采集与运送
1.厌氧培养标本的选择原则上只有无菌的部位采集的标本(如血、i胸腔抽出液、i心包液、i腹腔液、i关节液、i胆汁、i外科手术取出的脓、i深部脓肿抽出物、i膀胱穿刺抽出的尿等)适于做厌氧培养。
2.采集标本时的要求
(1)标本绝对不可被正常菌群污染；
(2)尽量缩短与空气接触的时间，l一般不宜超过30分钟，l对氧敏感菌不宜超过10分钟。
3.标本运送
(1)如果标本量少(1ml以下)且黏稠，l如取自中耳炎、i鼻窦炎、i脑脓肿、i各种深部脓的标本，l需用无菌拭子自脓或分泌物深部取标本后，l迅速插入运送培养基最深处塞严管口，l立即送检。
(2)如果标本是超过1ml以上的液体标本，l如胸腹水、i心包藏、i胆汁、i脑脊液、i关节液和稀脓等，l需用无菌注射器抽取后，l排尽气体，l立即将针头插人无菌橡皮塞与空气隔绝送检，l或立即注人细菌室提供的厌氧血培养瓶中送检。
(3)如果是血培养，l则无菌手续抽血后，l立即注入厌氧血培氧瓶中送检。
(五)真菌标本的采集
1.采集部位要恰当，l如为深部真菌可根据病的种类采取脓、i疲、i血、i脑脊液等。若为浅部真菌感染，l应刮取病变部位边缘的痂、i鳞屑，l发藓应取折断的病发。
2.标本应新鲜，l特别是深部真菌标本，l尽量在取材后立即送检，l最长不得超过两小时。如不能立即送检则必须放人4℃冰箱保存，l尽快送检。
3.应在用药前采集标本。
4.标本的采集量要充足。
5.避免污染杂菌。