自身免疫性溶血性贫血(autoimmune1hemolytic1anemla，lAIHA)是由于免疫功能调节紊乱，l体内产生了与红细胞自身抗原起反应的自身抗体，l并吸附于红细胞表面，l导致红细胞破坏的一种溶血性贫血。本病在小儿时期并不少见，l其发病数约占全部溶血性贫血的1／4左右。
【分类】
根据病因分为特发和继发两类，l小儿以特发居多。根据自身红细胞抗体性质分为三类：i即温抗体型、i冷抗体型和温冷双抗体型。温抗体型在37℃作用最强，l包括不完全型温抗体和温性溶血素。主要是IgG，l，l是一种不完全抗体。冷抗体型于4℃作用最强，l是一种完全抗体，l主要是IgM。温冷双抗体型，l即在同一患者身上既有温型自身红细胞抗体，l又有冷型自身红细胞抗体。
【血象和骨髓象】
急性型患者贫血较重，l慢性型和亚急性型患者的贫血大多较轻。急性型的网织红细胞常大于10％，l慢性型者有时减少，l亚急性型者多轻度增加，l再障危象时网织红细胞可极度减少。血涂片可见球形红细胞。骨髓红系统明显增生，l以中晚幼红为主，l粒红比值减低，l甚至倒置。
【抗人球蛋白试验(Coombs1test)】
此试验结果阳性是诊断本病的重要依据。本试验分为直接试验(direct1antiglobulin1test，lDAT)和间接试验(indirect1antiglobulin1test1IAT)，l前者是测定吸附于红细胞表面的不完全抗体，l后者是测定血清中游离的不完全抗体。这两种试验在AIHA患者大多呈阳性。尤其直接试验为阳性是诊断AIHA强有力的证据。但极少数患者(2％～4％)试验结果始终阴性。这种情况的发生主要与抗人球蛋白试验的敏感性不够有关。而专一性直接抗人球蛋白试验，l既用抗IgG、i抗IgA、i抗IgM、i抗C3特异血清检测，l提高Coombs试验的阳性率，l并可据此进一步将温抗体型自身免疫性溶血性贫血分为IgG型+C3型、iIgG型、iIgA型、iIgG与IgA混合型。下面介绍一下玻片凝集法抗人球蛋白试验。
1.原理 不完全抗体不能使含有相应抗原的红细胞发生凝集，l但能与其结合，l这种结合了不完全抗体的红细胞称为致敏红细胞。不完全抗体是球蛋白，l致敏红细胞就是红细胞被球蛋白包裹，l如在致敏红细胞的盐水溶液中，l加入抗人球蛋白血清，l由于球蛋白-抗球蛋白的特异反应，l使致敏红细胞发生凝集，l从而显示出不完全抗体的存在。
2.标本要求 病人空腹15％EDTA抗凝血2ml，l在采血后2小时内分离红细胞。
3.试剂 抗人球蛋白血清：i抗IgG、i抗IgM、i抗IgA、i抗C3、i红细胞洗液及阳性血清。
4.操作步骤
(1)洗涤EDTA抗凝血3次：i离心，l去血浆，l加人生理盐水洗血球三遍。
(2)配制10％红细胞悬液：i弃掉最后一次洗涤红细胞液的上清。准备一支新试管加生理盐水2ml，l加200μl红细胞，l混均。
(3)以IgG为例，l其他抗体做法相同。准备白色小瓷砖4块，l划线。在“1”、i"2"格加50ml抗体。在"3"～"8"格加生理盐水50ml。再吸50μl生理盐水与“2”中的抗体混均，l依次从“3”加到“7”作倍比稀释，l"8"为空白对照。在“1”至"8"各加50μl，l10％红细胞悬液。
(4)混均，l转板，l观察凝集情况。
(5)阳性对照：i每次试验需用阳性血清致敏O型红细胞作阳性对照，l(阳性血清0.lml+O型压积红细胞0.05ml，l37℃1小时.用红细胞洗液洗涤3次，l配成10％的红细胞悬液，l取抗人IgG1滴于玻片上，l再加1滴红细胞悬液)，l观察凝集结果。
(6)阴性对照；每次试验需用阳性血清致敏O型红细胞作阳性对照，l(阳性血清0.1ml+O型压积红细胞0.05ml，l37℃1小时，l用红细胞洗液洗涤3次，l配成10％的红细胞悬液，l取生理盐水1滴于玻片上，l再加1滴红细胞悬液)，l并以患者红细胞加生理盐水作同型阴性对照，l观察凝集结果。
5.参考值 如阴性对照不凝集，l患者红细胞出现凝集，l为阳性结果，l表示患者红细胞上有不完全抗体。
6.临床意义 直接试验是检查被检红细胞上有无不完全抗体吸附的情况，l这种情况常发生于自身免疫性溶血性贫血(患者红细胞被自身抗体致敏)、i新生儿溶血病(患儿的红细胞在胎儿时已被母亲的抗体致敏)，l溶血性输血反应(输异型血后，l不相合的红细胞被受血者抗体致敏)等。
【流式细胞仪法检测红细胞抗体】
1.原理 红细胞表面的抗体(免疫球蛋白)在一定外界条件下，l可与相应的抗人免疫球蛋白抗体结合，l当抗人球蛋白抗体结合了荧光标记物后，l即可用流式细胞仪检测。
2.标本要求 病人需空腹，lEDTA抗凝，l避免凝血及溶血。
3.试剂
(1)P.B.S缓冲液：i
(2)红细胞抗体试剂盒：i包括Goat1F(ab')Anti-Human1IgG(FcSp)Alexa1Fluot*48811.0ml、iGost1F(ab’)Anti-Human1IgG(FeSp)FITC11.Om[、iGoat1F(ab’)Anti-Human1IgM(u)FITC11.0ml、iGoat1F(ab’)Anti-Human1IgA(a)FITC11.0ml、iGoat1F(ab’)Anti-Human1IgA’s(Polyvalent)FITC11.0ml。
4.方法
(1)取50ul红细胞于流式标准管中，l用缓冲液洗4次，l每次离心11500rpm，l5分钟。
(2)用缓冲液重悬，l根据需要(5管共用500μ1)。红细胞浓度为1×107／ml。
离心后红细胞加入1ml缓冲液，l用血球计数仪计数，l将红细胞数调整为1×107／ml(上机重新确认)。
(3)每位病人取5只流式标准管，l编号1.同型对照2.Ig's、i3.IgG、i4.IgA、i5.IgM每管加入标本100μl，l再加各项试剂10μl，l混匀，l室温，l避光15min。
(4)用P.B.S缓冲液洗一次，l11500rpm，l5min。
(5)用1％多聚甲醛0.5ml固定，l放入冰箱，l3天内上机待测。
(6)流式细胞检测
5.常值Ig’s1110％～50％；IgG<2％；IgM<2％；IgA<2％。
6.临床意义 红细胞抗体检测是免疫性溶血诊断、i疗效及评价的有用指标。在自身免疫性溶血，l冷凝集素综合征，l阵发性睡眠性血红蛋白尿，lEven's综合征及新生儿同种免疫性溶血中，l红细胞抗体增高。其他自身免疫性疾病如系统性红斑狼疮、i类风湿性关节炎、i淋巴细胞增殖疾病(淋巴瘤、i白血病等)，l癌肿在无溶血表现时也可增高。红细胞抗体对低、i高敏状态都可做出检测，l但较抗人球蛋白实验特异性并未增加。应用流式细胞仪检测红细胞抗体，l灵敏度高，l受外界影响因素较小，l将检验结果量化，l为各种贫血的诊断及判别提供实验室依据。