骨髓增生异常综合征(MDS)是一组多能造血干细胞功能紊乱的造血系统疾病，l其特点为红细胞、i白细胞减少，l或血小板减少，l此综合征可以原发，l也可继发于长期的化疗、i放疗，l在疾病过程中可转化为白血病。

【类型】

从骨髓原始细胞的多少及外周血中原始细胞的有无将MDS分为5类：i

1.难治性贫血(RA)骨髓中原始细胞百分数<5％，l外周血原始细胞百分数<1％，l骨髓中环状铁粒幼细胞<全骨髓有核细胞的15％。

2.环形铁粒幼细胞增多的难冶性贫血(RAS)　骨髓与血中原始细胞百分数同RA，l但骨髓中环状铁粒幼细胞>全骨髓有核细胞的15％。

3.原始细胞增多的难治性贫血(RAEB)　骨髓中原始细胞5％～20％，l血中原始细胞<5％。

4.转变中的原始细胞增多的难治性贫血(RAEBT)11当血中原始细胞>5％，l骨髓中原始细胞>20％～30％或幼稚细胞中出现Auer小体等3种现象之一，l即可诊断为RAEBT。

5.慢性粒单性细胞白血病(CMML)　骨髓和血中原始细胞的百分率似RAEB，l并有少数原始单核细胞(<5％)，l血中单核细胞增多，l原始细胞指原始粒细胞及早幼粒细胞的总和。

【血象】

1.血色素及红细胞的变化　红细胞下降较血红蛋白明显，l网织红细胞多<1％，l偶有增加者。部分患者末梢血中可出现有核红细胞。成熟红细胞的形态似巨幼贫。红细胞大小不等，l以大为主，l可见巨大红细胞。偶见嗜多染红细胞及点彩红细胞。

2.白细胞的变化11白细胞数正常或减低。分类计数中粒细胞多减少，l淋巴细胞多增高，l有的患者血象中出现原始粒细胞，l早幼或中幼粒等。中型粒细胞质内颗粒稀少或缺如，l核分叶过多或过少，l且有异形粒细胞样变。单核细胞增高。

3.血小板的变化　多数减低，l少数正常。血涂片中血小板大小不均，l偶见巨大血小板，l结构疏松，l聚集不好，l少见患者血片中可出现淋巴样小巨核细胞或单圆核小巨核细胞。

【骨髓象】

骨髓的增生程度多为明显活跃，l少数患者增生明显活跃，l极少数患者增生减低。患者所处的FAB分型不同，l骨髓形态也不尽相同，l多数红系统增生亢进，l粒系统相对减低，l粒红比值减低。但在RAEBT时，l也可能粒系统增多，l红系统减少。粒系统中中晚幼粒可见巨幼样改变，l可见双核粒细胞。成熟阶段粒细胞胞浆中可见中毒颗粒。红系阶段均可见巨幼样改变，l可见双核红细胞，l巨核细胞增多，l1／4患者减少，l可见小巨核细胞，l淋巴样小巨核细胞更有意义。

【铁染色】

方法见缺铁性贫血一文中铁染色的介绍。细胞外铁多为十～++。细胞内铁5％～95％.多在50％。RAS期可见环形铁粒幼红细胞。

【糖原染色】

方法见白血病免疫组化中糖原染色一文:有核红细胞可为阳性，l阳性率7％～48％，l多在20％左右。

【小巨核细胞酶标染色】

1.原理　碱性磷酸酶(alkaline1phosphatase，lALP)和小鼠抗碱性磷酸酶抗体结合形成的可溶性复合物，l保留ALP活性和小鼠Ig的抗原性。当加入的小鼠抗CD41(第一抗体)单克隆抗体与巨核细胞上的CD41抗原反应后，l再相继与桥联抗体一兔抗小鼠IgG和AP-AAP复合物反应，l在与底物作用后，l含CD41抗原的巨核细胞即可呈色。

2.标奉要求

(1)骨髓涂片应在空气中干燥2小时以后染色，l如不能马上染色，l干燥后应将其用锡纸严密包好，l于20℃冰箱可保存半年；室温保存3天；4℃保存一周。4℃或-20℃保存的标本染色前，l将锡纸包恢复至室温后再进行染色，l否则，l空气中的水蒸汽凝结在涂片上会将细胞溶解，l形态模糊不清。

(2)较厚涂片在染色过程中易脱落，l最好选择较薄的涂片。

3.试剂

(1)除磷酸盐缓冲液外，l所有试剂购自协和干细胞基因工程有限公司，l包括一抗(鼠抗人CD41)1ml、i二抗(桥联抗体、i兔抗鼠IgG)1ml、i三抗(碱性磷酸酶抗碱性磷酸酶复合物)1ml、i底物液(α萘酚AS-BI磷酸盐)10ml、i坚固红20mg、iMayer苏木精染液、i0.5％氨水。

(2)试剂准备：i

①磷酸盐缓冲液(PBS，lpH7.2±0.2，l0.01M)磷酸氢二钠(Na2HPO4.12H2O)3.715g，l磷酸二氢钾(KH2PO4)0.43g，l氯化

钠7.2g，l溶于11000ml蒸馏水。

②固定液：i甲醇、i丙酮按1；1体积比混合。

③保存条件：i-20℃保存1年，l使用时4℃保存。苏木精、i氨水室温保存。

4操作步骤

(1)标本放人固定液中固定90秒钟，l晾干后做好标记。

(2)滴加一抗以盖满标本为宜，l室温反应60min，l用PBS将抗体冲净，l浸泡2次，l每次5min。晾干。

(3)滴加二抗以盖满标本为宜，l室温反应60min，l用PBS将抗

体冲净，l浸泡2次，l每次5min。晾干。

(4)滴加三抗以盖满标本为宜，l室温反应60min，l用PBS将抗体冲净，l浸泡2次，l每次5min。晾干。

(5)显色：i根据标本数目取适量底物液溶解坚固红(浓度为1mg／ml)，l滴加适量显色液于标本上，l显色5～20min。用低倍镜观察，l待细胞膜上出现明显的红色标记物时用自来水冲净晾干。

(6)Mayer苏木精复染50min，l用自来水冲净，l再用0.5％氨水返蓝5秒钟，l自来水冲净晾干。

5.结果判断　油镜下观察，l细胞核呈兰色，l细胞浆呈玫瑰红色标记的细胞为阳性细胞；无红标记物为阴性细胞。

正常巨核细胞(胞体>40μm)；双核巨核细胞(胞体>40μm)：i多棱巨核细胞(胞体>40μm)；单圆核小巨核细胞(胞体12～25μm)；大单圆核小巨棱细胞(胞体25～40μm)；双圆核小巨核细胞(胞体12～40μm)；多圆核小巨核细胞(胞体12～40μm)；淋巴样小巨核细胞(胞体<12μm)。

6.参考值　正常骨髓不应出现小巨核细胞，l若观察到小巨核细胞即为异常病理现象。

7.临床意义1骨髓增生异常综合征(MDS)的巨核细胞系统有质和量的异常，l以致骨髓中(有时甚至外周血中)出现形态异常的巨核细胞和血小板，l这类异常的巨核细胞多数核小，l胞体也小，l故称“小核型巨核细胞”(小巨核细胞)，l而正常时没有，l故在骨髓或外周血中出现，l有重要的临床意义。

【免疫学检查】

髓系细胞表面抗原及淋巴细胞亚群分布异常是MDS病态造血的另一种表现。

【染色体及分子生物学检验】

35％～70％病人染色体异常。