白血病临床上常有贫血、i感染、i出汗和肝、i脾、i淋巴结不同程度肿大等表现。分类方法常见有两种：i按白血病细胞的分化程度和自然病程分为急性白血病和慢性白血病；按白血病细胞的系列归属分为粒细胞性、i淋巴细胞性、i单核细胞性、i红白血病等多种类型。通常把上述两个原则结合起来运用，l如：i急性淋巴细胞白血病、i急性粒细胞性白血病、i慢性粒细胞白血病等。不同类型白血病治疗方案和愈后多不相同，l故正确的分类具有重要的临床意义。
急性白血病的细胞形态学分型法是基本的和最重要的分型法，l但也有其不足，l必须采用其他技术作进一步分型。在细胞免疫学和细胞遗传学飞速发展的今天，l细胞化学染色往往得不到足够的重视，l但其在临床上仍可为血液病的诊断、i鉴别诊断、i疗效及愈后观察，l提供重要的依据。
血细胞化学染色的方法很多，l各实验室方法也有差别，l下面介绍几种常用的细胞化学染色方法：i
(一)骨髓过氧化物酶染色
【原理】
白细胞内的过氧化物(POX)酶能将多种染料底物的氢原子转移给过氧化氢，l产生有色的染料衍生物并沉积在细胞内具有酶活性部位。
【标本要求】
1.标本需新鲜制作(1个月内穿刺合格的骨髓片为佳)、i及时固定。
2.染色液应临用前新鲜配制。
【试剂】
1.联苯胺 0.1g加无水甲醇20ml、i加蒸馏水5ml，l再加3％双氧水2滴。(玲暗保存)
2.姬姆萨复染液配制11姬姆萨粉1g加少许甘油研磨加100ml甲醇溶解，l12滴姬姆萨原液加10ml蒸馏水。
【操作步骤】
1.联笨胺溶液10滴盖满已干的血膜固定40秒。
2.再加蒸馏水20滴染色4min，l用蒸馏水轻轻地冲洗。
3.姬姆萨复染液复染20min，l用蒸馏水冲洗，l空气中干燥。镜检。
【质量控制】
镜检中性分叶粒细胞为阳性，l则说明实验在控(根据中性分叶粒细胞过氧化酶染色应为阳性)，l否则查找原因重新实验。
【结果判断】
呈阳性反应时可见胞浆有金黄色颗粒。POX阳性程度一般分弱阳性(胞浆中呈现黄色的弥漫性颗粒)、i阳性(胞浆中金黄色颗粒粗大且成堆分布)。
【临床意义】
1.淋巴细胞和红细胞在其成熟的各个阶段均无POX。中性粒细胞发育的各个阶段均有POX，l该酶位于嗜天青颗粒内。正常人的成熟嗜碱性粒细胞均无POX，l但在粒细胞白血病患者的嗜碱性粒细胞内则有POX。嗜酸性粒细胞呈POX强阳性发应，l但其POX不同于其他细胞。
2.有助于急性白血病类型的鉴别。白血病细胞POX阳性大于3％者，l多可排除急性淋巴细胞白血病。但较早的原粒细胞及大多数原单细胞POX染色可呈阴性，l因此在急性粒细胞白血病未分化型(M1)及急性单核细胞未成熟型(M5a)白血病细胞也可阴性为主，l甚至全部阴性。
3.有助于小原粒细胞白血病与急性淋巴细胞白血病的鉴别。两者从细胞形态上不易鉴别，l但小原粒细胞白血病使用POX染色，l常能找到大于10％的阳性原始及幼稚细胞，l而急性淋巴细胞白血病中，l仅小于3％的原始、i幼稚细胞为主。
(二)骨髓糖原染色
【原理】
高碘酸能将细胞内的糖原(包括其他多糖类，l如黏多糖、i黏蛋白和糖蛋白等)的乙二醇的羟基打开，l氧化成二醛基，l后者与雪夫试剂作用，l使无色品红变成紫红色燃料而沉积下来。
【标本要求】
1.标本需新鲜制作(1个月以内穿刺的合格骨髓片为佳)并及时固定。
2.染色液应临用前新鲜配制。
【试剂】
①高碘酸500mg溶于50ml蒸馏水中，l混匀；②苏木精染液；③雪夫试剂；④苏木精染液。
【操作步骤】
1.酒精(95％)固定骨髓片10min；
2.高碘酸溶液(1％)浸泡15min，l蒸馏水冲洗，l沥干；
3.雪夫试剂1小时，l避光染色，l取出后流水冲5min；
4.苏木精复染10～20min，l流水冲5mln，l沥干镜检。
【质量控制】
中性分叶粒细胞糖原染色应为阳性。因此镜检中性分叶粒细胞为阳性，l说明实验在控。否则查找原因重新实验。
【结果判断】
糖原在胞浆内为红色阳性物，l呈弥散状或块状。胞浆内无色或无颗粒为阴性。报告阳性率结果并积分，l说明阳性物形态。
“O”胞浆内无红色颗粒。
“+”胞浆中有一圈PAS阳性颗粒。
“++”胞浆中有两圈PAS阳性颗粒。
“+++”胞浆中有三圈PAS阳性颗粒。
“++++”胞浆中有红色大团块形成。
【临床意义】
1.粒细胞系统经糖原染色，l原始细胞多为阴性，l早幼粒以下各期细胞随细胞的发育、i成熟而阳性程度增加，l成熟中性粒细胞PAS阳性最强呈弥漫性；嗜酸性及嗜碱性粒细胞的特异性颗粒为阴性，l而胞浆部分则为阳性。单核细胞仅有少量、i细小的红色颗粒。幼红细胞为阴性。巨核细胞和血小板则为阳性。
2.有助干鉴别急性白血病的类型11在急性白血病细胞中，l若PAS反应呈粗颗粒，l甚至大块状，l而其胞浆背景又清晰者，l以急性淋巴细胞白血病(L1、iL2型)的可能性最大。
3.幼红细胞PAS阳性见于骨髓增生异常综合征(MDS)及红白血病。还见于地中海贫血、i缺铁性贫血和铁粒幼细胞性贫血。但再生障碍性贫血、i巨幼细胞性贫血均呈阴性反应。因此PAS染色有助于鉴别巨幼细胞性贫血与红白血病，l也可作为再生障碍性贫血与MDS鉴别的参考。
4.戈谢细胞呈强阳性，l而尼曼-匹克细胞为阴性或很弱阳性，l对两者鉴别有一定意义。
【注意事项】
1.过碘酸溶液浸泡时间不宜过长，l否则过度氧化影响结果。
2.过碘酸易潮解，l用后必须密封，l或放于干燥器内保存。
3.染色时间和温度应相对恒定，l一般37℃、i30min为好。
4.染色好的标本不能久置，l一周逐渐退色。因此应及时观察结果。
(三)骨髓氯醋酸AS-D萘酚酯酶染色
【原理】
细胞中酯酶能水解合成的底物萘酚酯而释放出萘酚，l并迅速与重氮盐耦联，l结果在酶活性部位有明亮色彩的沉淀物出现。
【标本要求】
1.标本需新鲜制作(1个月内穿刺合格的骨髓片为佳)、i及时固定。
2.染色液应临用前新鲜配制。
【试剂】
①氯醋酸AS-D萘酚、i固兰BB盐；②1mol／l盐酸、i巴比妥钠；③甲醛、i丙酮、i二甲基亚砜；④苏木精染液。
【操作步骤】
1.甲醛熏蒸37℃水冲4min待干；
2.氯醋酸AS-D萘酚40mg加丙酮2ml溶解；
3.固兰BB盐60mg加二甲基亚砜0.3ml溶解；
4.巴比妥盐酸缓冲液(pH7.4)；
(1)取1N盐酸1m／加39ml蒸馏水。
(2)取0.2g巴比妥钠溶于40ml蒸馏水中。
(3)取盐酸溶液21ml与巴比妥钠溶液29ml混匀，l用盐酸或巴比妥钠溶液调节pH值至7.4。
5.将固兰BB盐溶液加入至巴比妥盐酸缓冲液(pH7.4)中，l呈草绿色透明后再加入氯醋酸AS-D萘酚溶液，l混匀后成悬液，l过滤，l得到草绿色透明溶液，l即为基质液。
6.放入基质液中37℃1h，l取出水冲，l沥干。
7.苏木精复染10min，l水冲，l沥干镜检。
【质量控制】
(1)中性分叶粒细胞特异性染色应为阳性。中性分叶粒细胞为阳性，l则说明实验在控。否则查找原因重新实验。
(2)染色温度以38～39℃为宜，l此时酶反应强而无明显扩散，l并且奈酚和固兰BB盐较低温时易溶解。
【结果判断】
呈阳性反应时可见胞浆有蓝绿色颗粒，l早幼粒细胞为强阳性可作为鉴别依据。
【临床意义】
鉴别急性非淋巴细胞白血病类型：i若白血病细胞大部分强阳性时，l提示急性粒细胞、i急性早幼粒细胞白血病的可能性很大，l奥尔小体也常成阳性；如部分白血病细胞呈中度阳性则提示急性粒单细胞白血病；若全部或近乎全部阴性时，l则可能是急性单核细胞白血病。
(四)骨髓醋酸AS-D萘酚酯酶染色
【原理】
细胞中酯酶能水解合成的底物荣酚酯而释放出萘酚，l并迅速与重氮盐耦联，l结果在酶活性部位有明亮色彩的沉淀物出现。
【标本要求】
1.标本需新鲜制作(1个月内穿刺合格的骨髓片为佳)、i及时固定。
2.染色液应临用前新鲜配制。
【试剂】
1.基质液 将0.1mol／L磷酸氢二钠801ml与0.1mol／L磷酸二氢钾201ml混匀，l再用上述两种溶液调节pH值至7.0，l即得0.1mol／L磷酸盐缓冲液。
2.NASDA溶液 将醋酸AS-D萘酚盐16mg溶于丙酮3ml中，l再加入丙二醇2ml，l混匀。
3.固兰BB盐溶液将固兰BB盐200mg溶于二甲基亚砜1ml中。
【操作步骤】
1.甲醛37℃熏蒸4min，l水冲，l待干。
2.将NASDA溶液和固兰BB盐溶液分别滴人基质液中，l分别平均过滤至2个染缸中，l其中1个染缸加入75mg1NaF。
3.将已固定干燥的涂片分别放人上述两个染缸中，l37℃孵育1h，l取出水冲沥干。
4.苏木精复染10min，l水冲沥干，l镜检。
【质量控制】
中性分叶粒细胞特异性染色应为阳性，l镜检中性分叶粒细胞为阳性，l则说明实验在控。否则查找原因重新实验。
【结果判断】
呈阳性反应时，l可见胞浆有棕黄色颗粒，l随细胞的成熟程度而逐渐增强。
【临床意义】
鉴别急性单核细胞白血病与其他白血病：i急性单核细胞白血病细胞常为较强阳性，l其活性可被NaF抑制50％以上。急性粒细胞白血病为弱阳性或阳性，l急性早幼粒细胞白血病细胞则为强阳性，l但两者活性被NaF抑制小于50％。
(五)骨髓酸性磷酸酶染色
【原理】
细胞中的酸性磷酸酶能使底物萘酚AS-B1磷酸水解，l释放出不溶性萘酚，l后者与耦氮燃料坚固石榴红结合，l形成有色的物质。
【标本要求】
1.标本需新鲜制作(1个月内穿刺合格的骨髓片为佳)、i及时固定。
2.染色液应临用前新鲜配制。
【试剂】
1.萘酚AS-B1磷酸盐
2.Fast1red1Vloket1Lb
3.N-N二甲基酰胺
4.醋酸，l醋酸钠、i甲醛
【操作步骤】
1.甲醛熏蒸37℃水冲4min待干。
2.萘酚AS-B1磷酸盐15mg溶于N-N二甲基酰胺0.3ml。
3.0.2mol／l醋酸盐酸缓冲液(pH=5.2)50ml。
(1)0.2mol／l醋酸10.5ml与0.2mol／l醋酸钠39.5ml混合。
(2)Fast1red1Vloket1Lb30mg加入缓冲液内，l再加入已溶解好的萘酚AS-B1磷酸盐，l混匀，l调整pH至5.2，l过滤后使用。
4.苏木精复染10min水冲沥干，l镜检。
【结果判断】
阳性反应为鲜红色或深红色颗粒，l定位于胞浆。根据颗粒多少和染色的深浅将反应强度分为六级(0～5+)。
【临床意义】
鉴别浆细胞、i骨髓瘤细胞(阳性或强阳性)与淋巴细胞(阴性或弱阳性)；高雪细胞(强阳性)与尼曼-匹克细胞(阴性)。