免疫分型是诊断白血病的重要标志之一,1目前国际公认的方法是流式细胞术(FCM)。

(一)流式细胞仪的基本原理

流式细胞仪是综合了计算机技术、i激光技术、i电子物理技术、i流体力学、i细胞荧光化学、i细胞免疫化学等多门技术为一体的高科技仪器。概括来说流式细胞仪是在单个核细胞水平上对大量细胞进行快速、i准确、i多参数的分析技术。

标本与荧光标记的单克隆抗体和某些有特殊亲和力的荧光染料结合后成为细胞悬液，l该悬液在气体的压力下进人流动室，l流动室中充满鞘液，l在鞘液的约束下，l细胞排成单列从流动室的喷嘴中高速喷出成为细胞液柱。在液柱与入射光垂直的方向，l放置光学系统(透镜、i光阑、i滤片等)散射光和荧光穿过滤光片，l被接受并转变为电信号，l这些信号经过加工处理并储存于计算机中，l计算机软件对这些数据进行图像显示、i分析、i统计运算。流式细胞仪通过这些过程便可准确、i快速、i特异地获得细胞重要的物理、i化学及免疫学特征及各种参数。流式细胞仪常用的免疫荧光素有：i异硫氢酸荧光素(FITC1513nm)、i藻红蛋白(PE1575nm)、i别藻青蛋白(APC)和PerCP等，l它们经过488nm激光激发后可发出不同的荧光谱。

细胞经激光照射，l向空间360°立体角的所有方向散射光线，l其强弱与细胞的大小、i形状及内部结构有关，l称为散射光参数。其中前向角散射(FSC)及侧向角散射(SSC)光信号，l对细胞的分析有重要意义。FSC与检测细胞的体积大小呈正相关。SSC与检测细胞的细胞质、i细胞膜和细胞的颗粒形状有关。应用CD45／SSC双参数散点图，l可清晰地将幼稚细胞及成熟细胞划分出来，l(图9-27)。

(二)白血病免疫分型

至今人们尚未发现白血病的特异性抗原，l但基于白血病形成的分化阻断学说-由于分化受阻于某一阶段而形成不同亚型的白血病，l所以能用正常血细胞的单克隆抗体来进行白血病的免疫分型。单克隆抗体是细胞表面各种抗原的重要探针，l应用已知的单克隆抗体去鉴别细胞表面或胞浆中的免疫标志，l可用于分析细胞的来源及分化阶段。白血病的抗原常用一组相关抗原来确定。儿童白血病免疫分型常用的抗体及意义：i

T淋巴细胞白血病：iCD2、iCD3、iCD5、iCD7。

B淋巴细胞白血病：iCD10、iCD19、iCD20、iCD22、iCD79a。

髓细胞白血病：iCD13、iCD35、iCD11b、iCD15、iCD66、iCD14、iCD117、iMPO。

红白血病：iGIyA(血型糖蛋白A)。

巨核细胞白血病：iCD41、iCD42、iCD61。

白细胞共同抗原：iCD45(淋巴细胞高表达，l单核细胞，l粒细胞早期造血细胞依次减弱，l红细胞不表达)。

白细胞非特异性抗原：iCD34(早期细胞抗原)、iHLA-DR。

根据欧洲EGIL免疫分型建议，l如果在骨髓和外周血中，l具有某些分化抗原的淋巴细胞超过30％，l髓系细胞超过20％，l考虑为白血病细胞。免疫表型将急性淋巴细胞白血病(ALL)分为TALL和B-ALL(见下表)。B系ALL分为Pro-B(B-I)，l普通(Common)B(B-Ⅱ)，lprP-B(B-Ⅲ)和成熟(Mature)B(B-Ⅳ)细胞型。T-ALL按照胸腺细胞分化期分类，l但是目前认为这种分类的临床意义不大(见以下两个表)。

①阳性是至少3个标志中2个阳性。除B-Ⅳ1TdT外，l大部分病例TdT+、iHLA-DR+。

②大部分病例TdT+、iHLA-DR、iCD341-,1但这些标记在分型中不考虑。

急性髓细胞白血病的免疫分型(见下表)。

应用流式细胞仪进行免疫分型的优点有：i方法简便、i快捷；重复性好；可区分细胞的起源并能划分其分化发育阶段。不足之处在于，l目前尚未发现检测白血病细胞的特异性抗原；由于试剂和仪器的原因普遍推广此项检测尚有一定难度。