常见的非器官/组织特异性自身抗体(1)

人的上皮细胞在很多自身免疫病的实验室诊断中,l具有非常大的价值,l常被用于检测抗细胞核抗体(抗核抗体,lANA)等自身抗体。以良好制备的HEp-2细胞结合灵长类肝细胞的冷冻切片为基质的综合实验,l可对30种以上的具有诊断价值的自身抗体进行检测。通过分析Hep-2细胞的荧光模式可预先区分出阳性标本。如果需要,l再继续进行单特异性分析,l来确定自身抗体是针对哪种特定抗原。可选用酶联免疫测定法、i双扩散法、i血凝法及其他方法。然而,l目前只有小部分用Hep-2细胞检测到的抗体,l能得到进一步地单特异性检测,l因为可以得到的纯化抗原种类是有限的,l到目前为止并不是所有的相关抗原抗体系统都已被发现。

(一)抗双链DNA殛抗单链DNA抗体

1.同义名 抗双链DNA(dsDNA)抗体,l又称抗天然DNA抗体;抗单链DNA(ssDNA抗体),l又称抗变性DNA抗体。

2.实验基质洲定抗dsDNA11血鞭毛虫属的绿蝇短膜虫,l可联合使用Hep-2细胞及灵长类肝组织冷冻切片。

3.待检血清的起始稀释度 绿蝇短膜虫:i1:i101Hep-2细胞/猴肝复合片:i1:i100。

4.荧光抗体 异硫氰酸荧光素标记的抗人IgG抗体,l必要时加用异硫氰酸荧光素标记的抗人IgA、iIgG、iIgM抗体。

5.临床意义 几乎仅在系统性红斑狼疮病人中,l发现抗ds-DNA抗体,l因使用的实验方法和疾病活动度的不同,l其发生率为60%~90%。由于其特异性高,l抗ds-DNA抗体为该病的重要诊断标准之一。如果健康人血清中检测到此抗体,l则85%的人在五年内发展为系统性红斑狼疮。由于抗体的滴度与疾病活动度存在相关性,l因此抗体滴度的测定为监测治疗提供了有效的依据。但不能因为检测不到抗ds-DNA抗体,l而排除对系统性红斑狼疮的诊断。

(二)抗组蛋白抗体

1.同义名11组蛋白反应性抗核抗体。

2.实验基质 Hep-2细胞及灵长类肝组织冷冻切片。

3.待检血清的起始稀释度:i1:i100。

4.荧光抗体 异硫氰酸荧光素标记的抗人IgG抗体,l必要时用异硫氰酸荧光素标记的抗人IgA、iIgG、iIgM抗体。

5.临床意义 抗一种或多种组蛋白片断的抗体,l或者抗H2A-H2B复合体的抗体,l主要见于药物诱导的红斑狼疮(95%)。另外,l抗组蛋白抗体还见于30%~70%的非药物诱异的红斑狼疮以及15%~50%的类风湿性关节炎患者。

(三)桉糖核蛋白抗体及抗Sm抗体

1.同义名11通常指的抗核糖核蛋白抗体,l即为抗U1-nRNP抗体;Sm为抗史密斯抗体。

2.实验基质 Hep-2细胞及灵长类肝组织冷冻切片。

3.血清的起始稀释度1:100。

4.荧光抗体 异硫氰酸荧光素标记的抗人IgG抗体,l必要时加用异硫氰酸荧光素标记的抗人IgA、iIgG、iIgM抗体。

5.临床意义11高滴度的抗U1-nRNP为混合性结缔组织病(MTCD)的特征,l发生率为95%~100%。抗体的滴度与疾病的活动度相关。抗U1-nRNP也出现于系统性红斑狼疮患者,l但几乎总是与抗Sm抗体同时出现。

抗Sm抗体对系统性红斑狼疮具有高度特异性。与抗ds-DNA抗体一起,l被认为对系统性红斑狼疮具有确诊价值,l该抗体在系统性红斑狼疮病人中的发生率为20%~40%。

(四)抗SS-A抗体

1.同义名 抗干燥综合征A抗体。

2.实验基质 Hep-2细胞及灵长类肝组织冷冻切片。

3.待检血清的起姑稀释度1:i100。

4.荧光抗体 异硫氰酸荧光素标记的抗人IgG抗体。

5.临床意义 抗SS-A抗体与几种自身免疫病相关。常见于干燥综合征(40%~95%的病例),l也见于系统性红斑狼疮(20%~60%)及原发性胆汁性肝硬化(20%),l偶见慢性活动性肝炎。

抗SS-A两种蛋白(52kD)和(60kD)的抗体可见干燥综合征以及系统性红斑狼疮,l但单一抗52kD蛋白的抗体仅见于干燥综合征,l抗单60kD蛋白的抗体仅见于系统性红斑狼疮。此外,l发现抗SS-A抗体在新生儿红斑狼疮的发生率几乎为100%。该抗体可经过胎盘传人胎儿并引起炎症反应,l并且可引起先天性新生儿心脏传导阻滞。

6.其他 抗单-SS-A蛋白(52kD和60kD)抗体可以分别用单一重组蛋白为抗原,l采用酶联免疫吸附测定或免疫印迹技术测定。

(五)抗SS-B抗体

1.同义名 抗干燥综合征抗原B抗体。

2.实验基质 Hep-2细胞及灵长类肝组织冷冻切片。

3.待检血清的起始稀释度1:i100。

4荧光抗体 异硫氰酸荧光素标记的抗人IgG抗体。

5.临床意义1抗SS-B几乎仅见于女性患者(29:i11),l可出现在于燥综合征(40%~95%的患儿)以及系统性红斑狼疮(10%~20%)患者。在干燥综合征中,l抗SS-A抗体与SS-B抗体几乎是同时出现。

6.其他 单特异性测定可采用抗SS-B的酶联免疫吸附测定试剂盒。

(六)抗原纤维蛋白抗体

1.同义名 AFA,l抗U3-nRNP/原纤维蛋白抗体。

2.实验基质 Hep-2细胞及灵长类干组织冷冻切片。

3待检血清的起始稀释度1:i100。

4.荧光抗体 异硫氰酸荧光素标记的抗人IgG抗体,l必要时加用异硫氰酸荧光素标记的抗人IgA、iIgG、iIgM抗体。

5.临床意义 到目前为止,l抗原纤维蛋白抗体仅见5%~10%的进行性系统性硬化症(硬皮病)患者,l且男性病人的发病率(33%)高于女性(14%)。

(七)抗RNA多聚酶I抗体

1.同义名 RNApol1I抗体。

2.实验基质 Hep-2细胞及灵长类肝组织冷冻切片。

3.持检血清的起始稀释度1:i100。

4.荧光抗体  异硫氰酸荧光素标记的抗人IgG抗体,l必要时加用异硫氰酸荧光素标记的抗人IgA、iIgG、iIgM抗体。

5.临床意义 到目前为止,l抗RNA多聚酶I仅见于进行性系统性硬化症(硬皮病)。其发生率为4%。

(八)抗PM-SoL抗体

1.同义名 抗PMI抗体。

2.实验基质 Hep-2细胞及灵长类肝组织冷冻切片。

3.待检血清的起始稀释度1:i100。

4.荧光抗体 异硫氰酸荧光寨标记的抗人IgG抗体,l必要时加用异硫氰酸荧光紊标记的抗人IgA、iIgG、iIgM抗体。

5.临床意义 抗PM-ScL抗体可见与重叠综合征:i此病表现为多发性肌炎(PM)、i皮肌炎以及进行性系统性硬化症(PSS)三者症状的重叠。

(九)抗着丝点抗体

1.同义名 ACA,l抗动粒抗体。

2.实验基质 HEp-2细胞及灵长类肝组织冷冻切片。

3.待检血清的起始稀释度1:i100。

4.荧光抗体异硫氰酸荧光素标记的抗人IgG抗体,l必要时加用异硫氰酸荧光素标记的抗人IgA、iIgG、iIgM抗体。

5.临床意义 抗着丝点抗体对进行性系统性硬化症的局限型(CREST综合征)有确诊意义。其不仅对该型疾病的特异性很高,l且有很高阳性率(80%~95%)。

进行性系统性硬化症(系统性硬皮病)可以表现为两种不同的类型,l通常这两型并不容易区分。局限型患者为选择性肢体受累,l而内脏很少受累,l弥漫型患者则该病始发于四肢或躯干,l内脏严重受累,l病情进展迅速,l预后不良。

(十)抗ScL-70抗体

1.同义名 抗DNA拓扑异构酶I抗体,l抗硬皮病70抗体。

2.实验基盾 Hep-2细胞及灵长类组织冷冻切片。

3.待检血清的起始稀释度1:i100。

4.荧光抗体 异硫氰酸荧光素标记的抗人IgG抗体,l必要时加用异硫氰酸荧光素标记的抗人IgA、iIgG、iIgM抗体。

5.临床意义1依实验方法以及疾病的活动度不同,l25%~70%的进行性系统性硬化症(弥散型)患者抗ScL-70抗体阳性,l局限性硬皮病患者此抗体阴性。

6.其他 可以使用抗ScL-70酶联免疫吸附测定试剂盒,l对该抗体进行单特异性测定。

(十一)抗增殖性细胞核抗原抗体

1.同义名 抗PCNA抗体,l抗增殖蛋白I抗体。

2.实验基质 HEp-2细胞及灵长类肝组织冷冻切片。

3.待检血清的起始稀释度1:i100。

4.荧先抗体 异硫氰酸荧光素标记的抗人IgG抗体,l必要时加用异硫氰酸荧光素标记的抗人IgA、iIgG、iIgM抗体。

5.临床意义 抗PCNA抗体为系统性红斑狼疮特异性抗体,l但其发生率仅为3%。另据文献报道,l抗PCNA抗体可能与系统性红斑狼疮患者发生弥散性增殖性肾小球肾炎有关。

6.其他 另外还有一型称抗增殖蛋白Ⅱ抗体,l其荧光模式主要特点为分裂期的Hep-2细胞核荧光,l染色体区阴性,l而分裂期细胞核为阴性。

(十二)抗线粒体抗体

1.实验基质 多种基质可供选择,l如大鼠肾脏、i胃、i肝脏的冷冻组织切片以及Hep-2细胞等。

2.待检血清的起始稀释度1:i100。

3.荧光抗体 异硫氰酸荧光素标记的抗人IgG抗体,l必要时加用异硫氰酸荧光素标记的抗人IgA、iIgG、iIgM抗体。

4.临床意义11对原发性胆汁性肝硬化最具诊断意义的为AMA-2型,l发生率可达98%,l高滴度时对原发性胆汁性肝硬化的诊断特异性达97%。AMA亚型与发病率的相关性如下:i①AMA-1:i梅毒、i干燥综合征;②AMA-2:i原发性胆汁性肝硬化;③AMA-3:i假性红斑狼疮综合征、i药物诱导的系统性红斑狼疮;④AMA-4:i原发性胆汁性肝硬化与慢性自身免疫性肝炎重叠;⑤AMA-5:i系统性红斑狼疮、i自身免疫性溶血性贫血;⑥AMA-6:i由异丙烟肼引起的药物性肝炎;⑦AMA-7:i自身免疫性肝炎;⑧AMA-8:i自身免疫性肝炎、i闭塞性血栓血管炎;⑨AMA-9:i药物性肝炎;⑩AMA-10:i系统性红斑狼疮。

5.其他酶联免疫吸附测定法特异性检测M2、iM4、iM9。

(十三)抗核糖体抗体及抗核糖体P蛋白抗体

抗核糖体抗体在Hep-2细胞浆中,l产生一种细颗粒到均质状、i非常致密的荧光,l又是可见小空泡,l细胞核中常可见到核仁的荧光。如果有以上的荧光模式,l另外灵长类肝组织出现岛状荧光,l则可能是抗核糖体P蛋白抗体(ARPA),l它是系统性红斑狼疮特异性抗体之一,l可能与系统性红斑狼疮的精神症状有关。

(十四)抗Jo-1抗体

抗Jo-1抗体在间期细胞的整个细胞浆中产生一种颗粒到细块状荧光。有时细胞核也显示细颗粒荧光,l但可能较弱。在分裂期细胞中,l浓缩的染色体区不发荧光,l染色体周围的细颗粒荧光显得更缴密。当使用肝组织切片时,l仅可能在细胞浆中观察到弱的荧光。因此,l通常用免疫印记实验不能鉴定出该抗体。

抗Jo-1抗体见于多发性肌炎(有间质性肺纤维化),l发生率为25%~35%。如果用Hep-2细胞进行测定时,l看不到典型的阳性结果,l则可以认为抗Jo-1抗体不存在。然而,l免疫荧光法仅提供了抗体存在的可能性,l必要时,l应对该抗体进行单特异性实验进行确认(见下表)。