(一)应用恒冷箱切片机制备切片

是目前最适用方法。恒冷箱切片机种类较多，l应严格按有关厂商的说明书操作。用于切片的组织块必须未曾固定。

(二)应用开放式冷冻切片机制备切片

1.二氧化碳制冷切片

(1)将组织块放在冷冻台上，l滴加OCT或羟甲基纤维素液于组织块周围(将组织块包埋)，l使固定在切片机上的切片刀接近组织块表面。

(2)间断开放液态二氧化碳桶的开关，l喷冻组织块和切片刀，l使组织块冻结和切片刀制冷。

(3)迅速移动切片刀进行切片。先将组织块修平，l然后调节厚度至8～12um处进行切片。

(4)用毛笔将切片展开，l贴附于载玻片上，l稍干后，l置于冷冻切片固定液中固定1lmin，l随即进行HE染色。也可用毛笔将切片托入水中，l再用玻璃弯针将切片移至染色皿中进行染色。

(5)组织块也可先在4％中性甲醛中煮沸固定lmin，l水洗后再行冷冻切片。

2.半导体致冷切片

(1)切片刀与持刀器之间要间隔一层云母片或硬纸片。将冷刀致冷器粘在刀面上。

(2)将组织冷冻台安装在半导体切片机上。

(3)将冷冻台和切片刀致冷器上的导线连接在控制台直流电源上(注意：i正负电极不可接反)。

(4)连接致冷器的冷却水管并开始放水，l然后开启电源；冷却水管中的水流量不宜过大，l在使用过程不得断水。

(5)调整冷冻温度调节器，l至切片刀和冷冻台呈现霜冻。

(6)将新鲜组织块或已固定的组织放在冷冻台中央，l滴加水或OCT，l或用水调成糊状的羟甲基纤维素于组织块周围(将组织块包埋)。

(7)待组织块冷冻适当后，l进行切片。

(8)对于未经固定的新鲜组织，l用毛笔将制作满意的切片展平，l立即裱贴于盖玻片或载玻片上，l待冷冻的切片刚要融化时，l立即将其置于冷冻切片固定液中固定1lmin。对于已经固定的组织块，l可用毛笔将制作满意的切片托入水中，l再用玻璃弯针将切片移至染色皿中进行染色。

(9)切片完毕后，l先关闭电源，l再关闭冷却水，l待冰霜融化后擦干机器，l加罩。

3.甲醇致冷切片11按有关厂商的仪器说明书操作。

4.氯乙烷致冷切片

(1)将新鲜的或已经固定的组织块置于支持器中央，l加少许水或OCT。

(2)连续喷射氯乙烷于组织块上，l待组织块冻结后，l改为间歇喷射，l使冷冻适度，l立即切片。使用氯乙烷时应注意防火、i防爆。

(3)进行组织切片的裱贴、i固定和染色(与上述方法相同)。

(三)注意事项

1.制作冷冻切片所需的试剂和设备等应处于随时可供使用状态。

2.切取的组织块大小适宜(厚度＜2mm)，l并尽快置于冷冻组织切片机上制备切片。

3.调节冷冻程度，l试切合适时便迅速切片。冷冻不足无法切片，l冷冻过度切片易碎。

4.冷冻切片固定液。

(1)乙醚～乙醇液：i

无水乙醚11111份

95％乙醇11111份

(2)乙醇一冰醋酸液：i

95％乙醇1111100ml

冰醋酸11113～5滴