HE染色是应用最广泛的组织病理学常规染色技术。

(一)染色程序

1.石蜡切片HE染色(常规HE染色)

(1)二甲苯Ⅰ：i5～10min。

(2)二甲苯Ⅱ：i5～10min。

(3)无水乙醇Ⅰ：i1～3min。

(4)无水乙醇Ⅱ：i1～3min。

(5)95％乙醇Ⅰ：i1～3min。

(6)95％乙醇Ⅱ：il～3min。

(7)80％乙醇：i1min。

(8)蒸馏水：ilmin。

(9)苏木精液染色：i5～10min。

(10)流水洗去苏木精液：ilmin。

(11)1％盐酸一乙醇：i1～3s。

(12)稍水洗：i1～2s。

(13)返蓝(用温水或1％氨水等)：i5～10s。

(14)流水冲洗：i1～2min。

(15)蒸馏水洗：i1～2min。

(16)0.5％伊红液染色：i1～3min。

(17)蒸馏水稍洗：i1～2s。

(18)80％乙醇：i1～2s。

(19)95％乙醇Ⅰ：i2～3min。

(20)95％乙醇Ⅱ：i2～3min。

(21)无水乙醇Ⅰ：i3～5min。

(22)无水乙醇Ⅱ：i3～5min。

(23)石炭酸-二甲苯：i3～5min。

(24)二甲苯Ⅰ：i3～5min。

(25)二甲苯Ⅱ：i3～5min。

(26)二甲苯Ⅲ：i3～5min。

(27)中性树胶封固

上述(12)和(13)项可省去，l但(14)的冲水时间须延长至l0～15min(细胞核显示更清晰)；(23)项可用无水乙醇代替，l北方地区可省略。

2.冷冻切片HE染色

(1)冷冻切片固定：i10～30s。

(2)稍水洗：i1～2s。

(3)苏木精液染色(60℃)：i30～60s。

(4)流水洗去苏木精液：i5～10s。

(5)1％盐酸一乙醇：i1～3s。

(6)稍水洗：i1～2min。

(7)返蓝(用温水或1％氨水等)：i5～10s。

(8)流水冲洗：i15～30s。

(9)0.5％伊红液染色：i1～2min。

(10)蒸馏水稍洗：i1～2min。

(11)80％乙醇：i1～2min。

(12)95％乙醇：i1～2min。

(13)无水乙醇Ⅰ：i1～2min。

(14)无水乙醇Ⅱ：i1～2min。

(15)石炭酸-二甲苯：i2～3min。

(16)二甲苯Ⅰ：i2～3min。

(17)二甲苯Ⅱ：i2～3min。

(18)中性树胶封固。

上述(7)和(8)项可省去，l但(9)的冲水时间须延长至10～15min(细胞核显示更清晰)；(15)项可用无水乙醇代替，l北方地区可省略。

(二)染色结果

细胞核呈蓝色，l细胞质、i肌纤维、i胶原纤维和红细胞呈不同程度的红色。钙盐和细菌可呈蓝色或紫蓝色。

(三)染色注意事项

1.切片染色前，l应彻底脱蜡。

2.用含有升汞液体固定的组织，l其切片染色前应先脱去汞盐。

(1)石蜡切片脱蜡至水洗。

(2)Lugol碘液：i20min。

(3)流水冲洗：i5min。

(4)95％乙醇：i10min。

(5)水洗：ilmin。

(6)5％次亚硫酸钠水溶液：i5min。

(7)流水冲洗：i5min。

(8)显微镜观察除汞满意后，l转入HE染色。

3.脱除甲醛色素(必要时)。

(1)石蜡切片脱蜡至水洗。

(2)l％NaOH(1m1)与80％乙醇(99m1)混合液：i10min。

(3)流水冲洗：i5min。

(4)转入HE染色。

4.严格执行HE染色流程，l用显微镜控制细胞核的苏木精染色质量。HE染片应着色鲜艳，l红、i蓝分明，l对比清晰。

5.载玻片自二甲苯中取出后，l应立即用洁净、i光亮的盖玻片和稠度适宜的中性树胶湿封载玻片。封盖处内无气泡，l外无溢胶。封片时必须进行操作人员和局部环境的二甲苯污染防护。不应将组织切片烤干或风干后再行封片。

6.必须在载玻片的一端牢贴标签。标签上应印有病理科所在的医院名称。标签上应清楚显示有关的病理号及其次级号；标签上的病理号应准确无误，l无涂改。

7.制片完成后，l技术人员应将切片与其相应的病理学检查记录单或取材工作记录单认真进行核对；确认无误后，l将制备好的切片连同相关的活检申请单、i活检记录单以及取材工作单等一并移交给有关的病理医师；交接双方经核对无误后，l办理移交签字手续。

8.石蜡切片一HE染色的优良率(甲、i乙级切片所占的比率)应≥90％。石蜡切片-HE染色质量的基本标准列于表2—1。

9.制片工作一般应在取材后2个工作日内完成(不含进行脱钙、i脱脂等需要特殊处理的标本)。

10.制片过程出现意外情况时，l技术室人员应及时向病理医师和病理科主任报告，l设法予以补救。

(四)HE染色试剂的配制

1.苏木精染液

(1)Harri苏木精染液：i

苏木精111111111g

无水乙醇111110ml

硫酸铝钾1111120g

蒸馏水11111200ml

氧化汞111110.5g

冰醋酸11111118ml

先用无水乙醇溶解苏木精，l用蒸馏水加热溶解硫酸铝钾，l然后将该两液合并煮沸，l加入氧化汞，l继续加热和搅拌溶液至深紫色，l随即用冰水冷却，l恢复至室温后过滤备用。使用前加入冰醋酸并混匀、i过滤。

(2)Gill改良苏木精液：i

苏木精1111111112g

无水乙醇1111250ml

硫酸铝钾11111117g

蒸馏水111111750ml

碘酸钠1111110.2g

冰醋酸111111120ml

先用无水乙醇溶解苏木精，l用蒸馏水溶解硫酸铝钾，l然后将该两液混合，l再依次加入碘酸钠和冰醋酸。使用前过滤。

(3)Mayer改良苏木精液：i

A液：i苏木精1111111112g

无水乙醇11111140ml

B液：i硫酸铝钾11111100g

蒸馏水1111111600ml

将苏木精溶于无水乙醇中(A液)；稍加热，l使硫酸铝钾溶于蒸馏水中(B液)。将A液与B液混合后煮沸2min，l再用蒸馏水补足至600ml，l加入400mg碘化钠充分混匀。染液呈紫红色。

2.盐酸-乙醇分化液

浓盐酸111111111m1

70％乙醇1111991ml

3.伊红液

(1)0.25％～0.5％伊红Y水溶液：i

伊红Y1110.25～0.51g

蒸馏水11111111111001ml

冰醋酸1111111111111滴

(2)0.5％伊红Y-氯化钙水溶液：i

伊红Y111111110.51g

蒸馏水111111111001ml

无水氯化钙11110.51g

(3)0.25％～o.5％伊红Y-乙醇溶液

伊红Y11110.25～0.51g

80％乙醇1111111111001ml

4.石炭酸-二甲苯混合液

石炭酸11111份

二甲苯11113份