细胞学诊断检材的制备技术:涂片的固定

用于HE染色和巴氏染色的涂片必须湿固定,l即涂片后立即进行固定。乳头溢液涂片和液体标本离心沉淀物涂片,l应待涂膜潮干(即周膜稍干而其中央区域未干)时进行固定。用于瑞氏染色、iMay-Grfinwald-姬姆萨染色和免疫细胞化学染色的涂片,l必须干固定,l即待涂片稍干后再进行固定。

(一)固定液

1.乙醇-冰醋酸液95%乙醇:i冰醋酸1=99:i1,l常用。

2.乙醇-乙醚液1195%乙醇49.5ml,l乙醚49.5ml,l冰醋酸lml,l较常用。

3.甲醇滴加在于燥涂片上,l用于瑞氏染色、iMay-Grtinwald-姬姆萨染色和免疫细胞化学染色。

4.丙酮适用于酶类染色。

5.Carnoy液11由无水乙醇、i氯仿、i冰醋酸按6:i3:i1比例混成,l适用于显示核酸、i糖原、i黏液的染色。涂片在Carnoy液固定3~5min后,l应移入95%乙醇中继续固定。

对于液体标本的离心沉淀物、i食管拉网获取的小块组织或吸出物中的细小组织块等,l固定于4%中性甲醛中1h,l然后制作常规石蜡包埋切片。

(二)固定方法

1.浸入法

(1)将稍为干燥(不能完全干燥)的涂片直接浸泡于固定液内,l至少15~30min。

(2)因细胞容易脱落,l宜以一个盛有固定液的容器只固定1例标本的涂片。同一容器固定多例涂片时,l有可能造成肿瘤细胞的交叉污染。

(3)必要时可将标本涂在硅化载玻片上,l以防脱落。

(4)固定液重复使用时,l应先用滤纸过滤。

(5)95%乙醇固定液多次重复使用时,l须测定其浓度,l乙醇浓度低于90%时应予弃用。

2.滴加法11将固定液滴加于平放的干燥涂片上,l应避免因固定液挥发造成沉淀。

(三)固定后未染色涂片的保存或邮寄

涂片固定t5min后取出,l立即滴加数滴甘油于涂膜上。对该涂片进行染色前,l应先将其置于95%乙醇中溶去甘油。