最常用于细胞病理学涂片检查的是苏木精-伊红(HE)染色和巴氏染色。一些特殊染色、i组织化学染色和免疫组织化学染色也用于细胞病理学的涂片检查(参见第4章第一、i二节)。
(一)苏木精-伊红(HE)染色
参见本章第一节“六、i苏木精-伊红(HE)染色”。
(二)巴氏(Papanicolaou)染色
巴氏染色时,l细胞透明度好,l细胞结构清晰,l色彩丰富而鲜艳,l主要用于妇科细胞学涂片、i痰涂片和富含鳞状上皮细胞的涂片检查。
1.试剂配制
(1)Harri苏木精液:i参见本章第一节“六、i苏木精-伊红(HE)染色”。
(2)盐酸-乙醇液:i
浓盐酸 lml
70%乙醇111 1199ml
(3)橙黄G6液:i
橙黄G611111110.5g
蒸馏水11111111115ml
无水乙醇111111195ml
磷钨酸1111110.015g
先将橙黄G6溶于蒸馏水中,l再加入无水乙醇,l然后加入磷钨酸。
(4)EA36染液:i
①EA36储备液
A液:i亮绿0.59,l溶于5ml蒸馏水中,l溶解后加入无水乙醇至l00ml。
B液:i伊红0.59,l溶于5ml蒸馏水中,l溶解后加入无水乙醇至100ml。
C液:i俾士麦棕0.59,l溶于5ml蒸馏水中,l溶解后加入无水乙醇至100ml。
②EA36工作液
EA36储备液的A液1111451ml
EA36储备液的B液1111451ml
EA36储备液的c液11111101ml
磷钨酸1111111111111110.21g
碳酸锂饱和水溶液11111111滴
2.染色程序
(1)将已经固定的涂片置于80%乙醇中21min。
(2)蒸馏水洗21min。
(3)苏木精液染核10~121min,l自来水洗。
(4)盐酸一乙醇液分化约20~30s,l至涂片呈淡橙红色。
(5)流水冲洗l0~15min,l蒸馏水洗。
(6)依次用80%、i95%乙醇脱水,l各2min。
(7)橙黄G6液染色3~5min。
(8)95%乙醇洗2~3次,l洗去多余染液。
(9)EA36工作液染色3~51rain。
(10)95%乙醇洗2~3次,l洗去多余染液。
(11)元水乙醇脱水,l二甲苯透明,l中性树胶封片。
3.染色结果细胞核呈深蓝色,l核仁呈红色;不同分化类型的鳞状上皮细胞,l其细胞质颜色各异:i角化细胞呈粉红色,l不全角化细胞呈橙黄色,l角化前细胞呈淡蓝或淡绿色;红细胞呈橙红或鲜红色,l白细胞的细胞质呈淡蓝绿色;黏液呈淡蓝或粉红色。
(三)瑞氏(Wright)染色
瑞氏染色一般用于血液涂片,l也可用于检查肿瘤细胞。
1.试剂配制
(1)瑞氏染液:i
瑞氏染料11111g
甲醇111111600ml
将瑞氏染料放入研钵内,l加入适量甲醇与之混合研磨,l使染料逐渐溶解。将溶解的染液倾人另一玻璃瓶内,l然后再加入适量甲醇继续研磨;未溶解的染料如此反复多次,l直至染料完全溶解、i甲醇用完为止。染液避光保存备用。
(2)磷酸盐缓冲液:i
无水磷酸氢二钠11116.5g
磷酸二氢钠111111111114g
蒸馏水11111111111l1000ml
pH:i6.5~7.0
2.染色程序
(1)涂片自然干燥。
(2)滴加瑞氏液染色lmin。
(3)滴加等量的磷酸缓冲液,l轻轻摇荡玻片或用洗耳胶球在玻片上轻轻吹气,l使两液体混合均匀,l持续l0~15min。
(4)流水洗去染液。
(5)涂片风干后,l二甲苯透明,l中性树胶封片。
3.染色结果胞核呈紫红色,l细胞质呈紫蓝色,l黏液呈粉红色或淡蓝色。
(四)May-Grǚnwald-姬姆萨(Giemsa)染色
May-Grǚinwald-姬姆萨染色适用于造血系统的细胞涂片和鉴别恶型淋巴瘤的类型。May-Grtǚnwald原液和姬姆萨原液配制繁琐,l可直接购买。
1.试剂配制
(1)May-Grǚnwald工作液:i 1份
May-Grǚnwald原液 6~10份
蒸馏水使用前配制。
(2)姬姆萨工作液:i 1份
姬姆萨原液 6~10份
蒸馏水使用前配制。
2.染色程序
(1)涂片自然干燥,l蒸馏水洗1~2min。
(2)May-Grǚnwald工作液染15~30min。
(3)自来水冲洗,l洗去载玻片上的染液,l蒸馏水稍洗。
(4)姬姆萨工作液染15~30min。
(5)自来水冲洗,l洗去载玻片上的染液。
(6)涂片风干后,l二甲苯透明,l中性树胶封片。
3.染色结果胞核呈紫红色,l细胞质和核仁呈蓝紫色。
(五)Rakoff染色
Rakoff染色用于阴道细胞学涂片快速测定雌激素水平。
1.试剂配制
(1,l5%淡绿水溶液11183ml
(2)1%伊红水溶液111117ml
将两液混合后使用。
2.染色程序
(1)用细胞刷沿阴道侧壁刷取黏膜鳞状上皮细胞,l放入装有1~2ml生理盐水的试管内。
(2)在试管内滴入3滴Rakoff染液,l用细胞刷在染液中轻摇混合。
(3)将1~2滴混合液滴于载玻片上,l制成涂片。
(4)待涂片干燥后,l用中性树胶封片。
3.染色结果鳞状上皮细胞的嗜酸性和嗜碱性细胞质区分明显。角化前细胞的核呈网状,l角化细胞的固缩核呈基本不着色的空泡状。
(六)猩红-固绿染色
猩红一固绿染色用于显示性染色体。
1.试剂配制
(1)猩红染液:i
水溶性比布里西猩红11111.0g
磷钨酸 0.3g
冰醋酸1111111111111115.0ml
50%乙醇11111111111111100ml
(2)固绿染液
固绿11111111111111110.5g
磷钼酸111111111111110.3g
磷钨酸111111111111110.3g
冰醋酸11111111111115.0m1
50%乙醇111111111111100ml
2.染色程序
(1)涂片经95%乙醇固定后,l置于70%乙醇中2min。
(2)猩红染液中5min。
(3)50%乙醇中漂清多余染液。
(4)固绿染液中分化2~5h。每小时在显微镜下观察细胞质和网状核膜是否呈现绿色;如果绿色满意,l立即取出涂片(一般约需4h)。固缩核呈鲜红色。
(5)50%乙醇中5min。
(6)依次置于70%、i95%和无水乙醇中各2min。
(7)置于二甲苯溶液Ⅰ、iⅡ、iⅢ中透明,l各2min。
(8)中性树胶封片。
3.染色结果胞核呈淡绿色;性染色质呈粉红色、iV字形或贴着于细胞膜呈三角形。在性染色质周围可见空泡。
(七)Fouchet染色
Fouchet染色用于显示胆色素。
1.染液配制Fouchet染液:i
A液:i25%三氯醋酸水溶液
B液:i10%三氯化铁水溶液
A、iB液皆小量新鲜配制为宜。使用时,l取A、iB液各30ml混匀(当天使用)。
2.染色程序
(1)涂片经95%乙醇固定后,l置于蒸馏水中漂洗。
(2)Fouchet液中染5min。
(3)蒸馏水Ⅰ、iⅡ中各lmin。
(4)苦味品红溶液中染5min。
(5)95%乙醇Ⅰ、iⅡ中漂洗。
(6)无水乙醇Ⅰ、iⅡ中脱水。
(7)二甲苯Ⅰ、iⅡ中透明,l中性树胶封片。
3.染色结果胆色素呈橄榄绿色,l胶原纤维呈红色,l涂片背景呈黄色。
(八)硫酸亚铁染色
硫酸亚铁染色用于显示黑色素。
1.试剂配制
(1)2.5%硫酸亚铁水溶液。
(2)铁氰化钾醋酸液:i
铁氰化钾11111g
蒸馏水111199ml
冰醋酸111111lml
(3)1%冰醋酸水溶液。
(4)核固红液[参见第4章第一节“二、i”项“(一)氢氧化银氨液浸染法(I)”]。
2.染色程序
(1)涂片经95%乙醇固定后,l置于蒸馏水中漂洗1~2min。
(2)2.5%硫酸亚铁溶液中1h。
(3)蒸馏水Ⅰ、iⅡ、iⅢ中漂洗,l各lmin。
(4)铁氰化钾醋酸液中30min。
(5)l%冰醋酸液中1min。
(6)蒸馏水漂洗。
(7)核固红液中染1~2min。
(8)蒸馏水漂洗。
(9)依次95%乙醇、i无水乙醇脱水,l二甲苯透明,l中性树胶封片。
3.染色结果黑色素呈深绿或深蓝色,l涂片背景呈红色或粉红色。
(九)快速硝酸银染色
快速硝酸银染色用于显示卡氏肺囊虫和真菌。
1.试剂配制
(1)硝酸银乌洛托品。
常备液:i3%乌洛托品溶液l00ml与5%的硝酸银溶液5ml充分混合。
工作液:i常备液25ml、i蒸馏水25ml与5%硼酸钠2ml充分混合。
(2)固绿。
常备液:i固绿0.29充分溶解于0.2%冰醋酸液l00ml中。
工作液:i常备液l0ml与蒸馏水40mi混合。
(3)5Yoo铬酸溶液,ll%亚硫酸氢钠溶液,l0.2%氯化金溶液,l2%硫代硫酸钠溶液。
2.染色程序
(1)涂片经95%乙醇固定后,l置于蒸馏水中漂洗lmin。
(2)5%铬酸溶液(43℃水浴)中2min。
(3)5%铬酸溶液(58℃水浴)中15min。
(4)自来水漂洗。
(5)1%亚硫酸氢钠溶液中30s。
(6)自来水冲洗15s。
(7)蒸馏水Ⅰ、iⅡ、iⅢ、iⅣ漂洗各lmin。
(8)硝酸银工作液(43℃水浴)中2min。
(9)硝酸银工作液(58℃水浴)中23min。
(10)蒸馏水Ⅰ、iⅡ、iⅢ、iⅣ漂洗。
(11)0.2%氯化金溶液中30s。
(12)蒸馏水Ⅰ、iⅡ漂洗。
(13)2%硫代硫酸钠溶液中1min。
(14)自来水冲洗15s。
(15)固绿工作液中染30s。
(16)自来水冲洗15s。
(17)蒸馏水Ⅰ、iⅡ漂洗。
(18)95%乙醇、i无水乙醇脱水,l二甲苯透明,l中性树胶封片。
3.染色结果卡氏肺囊虫和真菌皆呈黑色,l形状清晰;糖原和黏蛋白呈玫瑰色或灰色;涂片背景呈淡绿色。
(十)高碘酸一无色品红(PAS)染色
PAS染色用于显示多糖(糖原及黏蛋白等),l参见第4章第一节“八、i”项“(一)高碘酸一无色品红(PAS)法”。