(一)氢氧化银氨液浸染法(I)
1.试剂配制
(1)Gordon-Sweets银氨液:i用小量杯盛10%硝酸银水溶液2ml,l逐滴加入氢氧化铵,l边滴边摇动容器。先出现沉淀物,l继续滴人氢氧化铵至所形成的沉淀物恰好溶解。加入3%氢氧化钠水溶液2ml,l再次形成沉淀。继续滴入氢氧化铵,l直至沉淀物再次恰好溶解。最后加蒸馏水至40ml,l配好后用棕色砂塞瓶盛装,l置于4℃冰箱内保存,l使用前取出恢复到室温。
(2)酸化高锰酸钾水溶液:i
甲液:i0.5%高锰酸钾水溶液
高锰酸钾110.5g
蒸馏水1111100ml
乙液:i0.5%硫酸水溶液
硫酸11111110.5ml
蒸馏水111199.5ml
甲、i乙两液分瓶盛装,l临用前等份混合。
(3)2%草酸液:i
草酸111111112g
蒸馏水1111100g
(4)2%硫酸铁铵液:i
硫酸铁铵111111112g
蒸馏水1111111100ml
(5)4%中性甲醛液
甲醛(40%)1111110ml
蒸馏水1111111190ml
碳酸钙加至饱和,l用时取其上清液。
(6)核固红染液:i
核固红111110.1g
硫酸铝111111115g
蒸馏水11111100ml
麝香草酚111150mg
先把硫酸铝溶于蒸馏水,l然后加入核固红,l稍加温溶解,l冷却后过滤,l最后加入麝香草酚。
2.染色程序
(1)组织块固定于4%中性甲醛液中,l常规脱水、i石蜡包埋和切片。
(2)切片脱蜡至水。
(3)酸化高锰酸钾液氧化5min。
(4)稍水洗。
(5)2%草酸水溶液漂白1~2min。
(6)稍水洗。
(7)2%硫酸铁铵水溶液媒染5min。
(8)稍水洗,l再用蒸馏水洗1次。
(9)滴加Gordon—Sweet银氨液,l作用lmin。
(10)蒸馏水稍洗。
(11)4%中性甲醛液还原lmin。
(12)流水冲洗5~10min。
(13)以0.2%氯化金调色1~2min。
(14)蒸馏水洗。
(15)固定于5%硫代硫酸钠2min。
(16)用核固红液复染5~10min或行HE复染。
(17)稍水洗。
(18)常规脱水、i透明,l中性树胶封固。
3.染色结果11网状纤维呈黑色,l胞核呈红色(用核固红复染)或蓝色(用苏木精复染),l胶原纤维呈黄棕色,l细胞质呈淡红色(用伊红复染)。
(二)氢氧化银氨液浸染法(Ⅱ)
1.试剂配制
(1)Gomori银氨液配制:i用小量杯盛10%硝酸银水溶液3份,l加入10%氢氧化钾水溶液1份,l即发生棕黑色颗粒沉淀,l观察此溶液的总量并记下,l加入10倍以上的蒸馏水洗涤沉淀物,l然后倾去上清液,l再加入蒸馏水。如此反复洗涤3次,l最后加蒸馏水至原来记下的份量。然后滴入氢氧化铵并不断摇荡,l直到沉淀物完全溶解。再次加入10%硝酸银水溶液数滴至溶液稍变混浊,l再加入氢氧化铵一滴至数滴,l使溶液再次变清。最后按原总量加蒸馏水lo~15倍稀释,l平时保存于4℃冰箱,l用前取出恢复到室温。
(2)0.25%高锰酸钾液:i
高锰酸钾11111110.25g
蒸馏水111111111100ml
(3)2%草酸液:i
草酸11111111111112g
蒸馏水11111111100ml
(4)2%硫酸铁铵水溶液
硫酸铁铵111111112g
蒸馏水11111111100ml
(5)4%中性甲醛液:i
甲醛(40%)11111111110ml
蒸馏水111111111111190ml
2.染色程序
(1)组织块固定于4%中性甲醛液中,l常规脱水、i石蜡包埋和切片。
(2)切片脱蜡至水。
(3)0.25%高锰酸钾液氧化5min。
(4)稍水洗。
(5)2%草酸液漂白1~2min。
(6)稍水洗。
(7)2%硫酸铁铵水溶液媒染5min。
(8)稍水洗,l再用蒸馏水洗1次。
(9)滴入Gomori银氨液作用3~5min。
(10)蒸馏水稍洗。
(11)4%中性甲醛液还原lmin。
(12)流水冲洗5~10min。
(13)以0.2%氯化金调色1~2min。
(14)蒸馏水洗。
(15)固定于5%硫代硫酸钠2min。
(16)常规脱水、i透明,l中性树胶封固。
3.染色结果11网状纤维呈黑色,l胶原纤维呈黄至黄棕色,l胞核呈灰褐色。