(一)硝酸银法
1.试剂配制
(1)缓冲硝酸银液:i
1%硝酸银水溶液(新鲜配制)11111113ml
0.2mol/L醋酸缓冲液(pH5.6)1110ml
双蒸水111111111111111111111111187ml
(2)还原液:i
对苯二酚11111111111111111111111111g
亚硫酸钠11111111111111111111111115g
蒸馏水111111111111111111111111100ml
以上两液应于使用前配制。
(3)5%硫代硫酸钠液:i
硫代硫酸钠1111111111111111111111115g
蒸馏水1111111111111111111111111100ml
2.染色程序
(1)组织块以固定于Bouin液为佳,l也可固定于4%中性甲醛液中,l常规脱水、i石蜡包埋和切片。用Bouin液固定的组织块须流水冲洗过夜。
(2)切片脱蜡至水,l用蒸馏水再洗2次。
(3)切片放入预热(60℃)的缓冲硝酸银液3h。
(4)用滤纸稍吸去载玻片周围银液,l蒸馏水速洗。
(5)人还原液(45℃)处理lmin。
(6)蒸馏水洗,l显微镜下观察。
(7)5%硫代硫酸钠液处理lmin。
(8)流水冲洗10min。
(9)95%乙醇和无水乙醇脱水。
(10)二甲苯透明,l中性树胶封固。
3.染色结果1111胰岛α细胞细胞质内颗粒呈棕黑色,lβ和γ细胞细胞质呈阴性。
(二)醛品红-橙黄G法
1.试剂配制
(1)醛品红染液:i参见本节“三、i”项“(一)醛品红法”。
(2)橙黄G染液:i参见本节“三、i”项“(一)醛品红法”。
2.染色程序
(1)新鲜组织块固定于Bouin液,l流水冲洗过夜,l常规脱水、i石蜡包埋和切片。
(2)常规脱蜡至水。
(3)酸化高锰酸钾液氧化5min。
(4)稍水洗。
(5)2%草酸液漂白2~3min。
(6)流水冲洗5min。
(7)70%乙醇稍洗。
(8)醛品红液染15~30min。
(9)70%乙醇稍洗,l至无多余颜色脱下。
(10)稍水洗。
(11)橙黄G液复染约1s。
(12)稍水洗后,l常规脱水、i透明,l中性树胶封固。
3.染色结果 β细胞细胞质内颗粒呈紫红至深紫色,l背景为淡黄色。