(一)酸水解一无色品红法

1.试剂配制

(1)无色品红液(Schiff试剂)：i参见本节“八、i”项“(一)高碘酸一无色品红(PAS)法”。

(2)0.5％偏重亚硫酸钠液：i参见本节“八、i”项“(一)高碘酸一无色品红(PAS)法”。

(3)0.2％亮绿水溶液：i

亮绿11111111111110.2g

蒸馏水1111111111100ml

(4)lmol／L盐酸水溶液

浓盐酸11111111118.4ml

蒸馏水11111111191.6ml

(5)火棉胶液：i

火棉胶片111111110.5g

无水乙醇11111111150ml

乙醚111111111111150ml

先把无水乙醇与乙醚混合，l再加入火棉胶片充分溶解。

2.染色程序

(1)组织块固定于Carnoy液或4％中性甲醛液中，l常规脱水、i石蜡包埋和切片。

(2)切片经二甲苯脱蜡。

(3)无水乙醇浸洗2次，l每次约lmin。

(4)入火棉胶液浸lmin，l取出后稍凉干。(可省去)

(5)80％乙醇10min。

(6)70％乙醇稍洗。

(7)蒸馏水稍洗。

(8)室温中的1N盐酸稍洗。

(9)预热至60℃的1N盐酸水解6～8min。

(10)室温中的1N盐酸稍洗。

(11)蒸馏水稍洗。

(12)入无色品红液，l于室温下置暗处染色60～90min。

(13)不经水洗，l直接滴入0.5％偏重亚硫酸钠液洗2次，l每次约5min。

(14)流水洗5min。

(15)0.2％亮绿水溶液复染1～3s。

(16)稍水洗。

(17)常规脱水、i透明，l中性树胶封固。

3.染色结果脱氧核糖核酸呈紫红色，l细胞质和其他组织呈绿色。

(二)甲基绿派洛宁法

1.试荆配制

(1)2％甲基绿水溶液：i

甲基绿1111111g

蒸馏水111150ml

须经三氯甲烷抽提，l除去甲基紫成分后使用。

甲基绿水溶液的抽提方法：i取2％甲基绿水溶液20ml倾人洁净分液漏斗，l加入三氯甲烷20ml充分摇荡混合，l使其内的甲基紫溶于三氯甲烷中而呈紫红色。慢慢把下沉带紫红色的三氯甲烷移去，l再加入新的三氧甲烷10ml。如此反复更换三氯甲烷，l直到三氯甲烷无紫红色为止，l即可得到提纯的甲基绿溶液。

(2)5％派洛宁水溶液：i

派洛宁G1111111111115g

蒸馏水11111111111100ml

(3)0.2M醋酸盐缓冲液(pH4.8)：i

0.2M醋酸液11111141ml

0.2M醋酸钠液111159ml

(4)甲基绿派洛宁染液：i

2％甲基绿水溶液1111111115ml

5％派洛宁水溶液1111111111ml

蒸馏水1111111111111111112ml

0.2M醋酸盐缓冲液1111159ml

2.染色程序

(1)新鲜组织块固定于Carnoy液(4℃)中3～6h，l经95％乙醇和无水乙醇脱水，l二甲苯透明，l石蜡包埋并切片。

(2)切片经二甲苯脱蜡至蒸馏水。

(3)置入甲基绿派洛宁染液，l室温下染30～60min。

(4)取出切片，l不经水洗，l用滤纸吸干载玻片多余染液。

(5)用丙酮迅速分化。

(6)转入丙酮二甲苯(1：i1)稍洗。

(7)二甲苯透明2～3次。

(8)中性树胶封固。

3.染色结果11细胞质和核仁内的核糖核酸呈红紫色，l细胞核染色质内的脱氧核糖核酸呈绿色或绿蓝色。