特殊染色和组织化学技术:黏液染色

(一)爱先蓝-高碘酸-无色品红法

1.试剂配制

(1)爱先蓝液(pH2.5):i参见本节“八、i”项“(三)爱先蓝(alcian1blue)法”。

(2)0.5%高碘酸液:i

高碘酸11110.5g

蒸馏水1111100ml

保存于4C冰箱内,l使用前取出恢复至室温。

(3)0.5%偏重亚硫酸钠液:i参见本节“八、i”项“(一)高碘酸一无色品红(PAS)法。”

(4)无色品红液:i参见本节“八、i”项“(一)高碘酸一无色品红(PAS)法”。

(5)天青石蓝液:i参见本节“九、i”项“(一)荧光红桃一酒石黄法”。

(6)Mayer苏木精液:i参见第3章第一节“六、i”项“(四)HE染色试剂的配制”。

(7)橙黄G液:i参见本节“九、i”项“(二)醛品红法”。

2.染色程序

(1)组织块固定于4%中性甲醛液中,l常规脱水、i石蜡包埋和切片。

(2)切片脱蜡至水。

(3)用爱先蓝液(pH2.5)染10~201min。

(4)稍水洗。

(5)0.5%高碘酸液氧化5~10min。

(6)流水冲洗2min,l再用蒸馏水洗1次。

(7)于暗处,l无色品红液加盖作用10~20min。

(8)0.5%偏重亚硫酸钠液滴洗2次,l每次lmin。

(9)流水冲洗2min。

(10)天青石蓝液染2~3min。

(11)稍水洗。

(12)Mayer’S苏木精染2~3min。

(13)稍水洗。

(14)1%盐酸乙醇分化。

(15)流水冲洗10min。

(16)橙黄G液复染10~20s。

(17)稍水洗。

(18)常规脱水、i透明,l中性树胶封固。

3.染色结果1111酸性黏液呈蓝色,l中性黏液呈红色,l混合黏液呈紫红色。

(二)爱先蓝(pH2.5)法

1.试剂配制(1)爱先蓝液(pH2.5):i参见本节“八、i”项“(三)爱先蓝(alcian1blue)法”。

(2)核固红液:i参见本节“二、i”项“(一)氢氧化银氨液浸染法(I)”。

(3)0.1%沙红染液:i

沙红1111110.1g

蒸馏水1111199ml

冰醋酸1111111lml

2.染色程序

(1)组织块固定于4%中性甲醛液中,l常规脱水、i石蜡包埋和切片。

(2)切片脱蜡至水。

(3)爱先蓝(pH12.5)液染10~20min。

(4)流水稍洗。

(5)核固红复染5~10min,l或用沙红染液复染2~31min。

(6)稍水洗。

(7)常规脱水透明,l中性树胶封固。

3.染色结果11唾液酸黏液和弱硫酸化黏液以及一般黏液均呈蓝色,l各种强硫酸化黏液不着色或淡染,l细胞核呈红色。

(三)爱先蓝(pH1.0)法

1.试剂配制

(1)爱先蓝液(pHl.0):i

爱先蓝8GX1111111111111lg

0.1N盐酸水溶液1111100ml

(2)0.1N盐酸水溶液:i

纯盐酸1110.84ml

蒸馏水1111100ml

核固红染液:i参见本节“二、i”项“(一)氢氧化银氨液浸染法(I)”。

2.染色程序

(1)组织块固定于4%中性甲醛液中,l常规脱水、i石蜡包埋和切片。

(2)切片脱蜡至水。

(3)爱先蓝液(pHl.0)染20~30min。

(4)0.1N盐酸稍洗。

(5)不经水洗,l用滤纸吸干多余盐酸。

(6)核固红复染5~10min。

(7)稍水洗。

(8)常规脱水、i透明,l中性树胶封固。

3.染色结果11含硫酸黏液物质呈蓝色,l非硫酸化酸性黏液物质不着染,l胞核呈红色。

(四)高铁二胺-爱先蓝法

1.试剂配制

(1)高铁二胺液:i

N,lN-二甲基-间-苯二胺二盐酸盐1111120mg

N,lN-二甲基-对-苯二胺二盐酸盐1111120mg

蒸馏水111111111111111111111111111150ml

60%三氯化铁水溶液1111111111111111.5ml

将两种二胺盐同时溶于蒸馏水,l彻底溶解后,l加入60%三氯化铁液,l用玻棒轻轻搅匀。此时溶液的pH值应为1.4~1.5。

(2)爱先蓝染液(pH2.5):i参见本节“八、i”项“(三)爱先蓝(alcian1blue)法”。

(3)核固红染液:i参见本节“二、i”项“(一)氢氧化银氨液浸染法(Ⅰ)”。

2.染色程序

(1)组织块固定于4%中性甲醛液中,l常规脱水、i石蜡包埋和切片。

(2)切片脱蜡至水。

(3)高铁二胺液于室温染色18~24h。

(4)流水冲洗。

(5)用爱先蓝液(pH2.5)染10~20min。

(6)稍水洗(必要及可复染核固红)。

(7)常规脱水、i透明,l中性树胶封固。

3.染色结果硫酸化酸性黏液呈紫棕色至棕黑色,l羧基化酸性黏液呈蓝色,l细胞核呈红色(复染核固红时)。