主要方法为六胺银法。
1.试剂配制
(1)0.5%高碘酸水溶液:i参见本节“二十四、i”项“(一)高碘酸一无色品红(PAS)法”。
(2)1%偏重亚硫酸钠液:i
偏重亚硫酸钠11111g
蒸馏水1111111100ml
保存于4℃冰箱内,l使用前取出恢复至室温。
(3)8%铬酸水溶液:i
铬酸1111111118g
蒸馏水1111100ml
(4)Gomori六胺银贮备液:i
5%硝酸银液11111111115ml
3%六次甲基四胺1111100ml
将5%硝酸银液慢慢加入3%六次甲基四胺水溶液中,l随即形成乳白色沉淀,l在摇动中沉淀即溶解变清。澄清液盛于棕色小口砂塞瓶内,l置于4℃冰箱内保存待用。
(5)5%四硼酸钠水溶液:i
四硼酸钠11115g
蒸馏水1111100ml
(6)六胺银工作液:i
Gomori’S六胺银贮备液111110ml
蒸馏水111111111111111111125ml
5%四硼酸钠水溶液1111111112ml
将四硼酸钠液加入蒸馏水中,l然后加入Gomori六胺银贮备液,l混合均匀后可使用。
(7)0.1%氯化金水溶液。
2.染色程序
(1)组织块宜固定于Bouin液,l也可固定于4%中性甲醛液中,l常规脱水、i石包埋和切片。
(2)常规脱蜡至水。
(3)0.5%高碘酸氧化15min。
(4)流水冲洗5min。
(5)8%铬酸氧化30min。
(6)流水稍洗。
(7)1%偏重亚硫酸钠液处理lmin。
(8)流水冲洗5min,l再用蒸馏水洗。
(9)切片放入预热至60℃的六胺银工作液中,l于60℃恒温箱内作用30~60min,l直至切片在黄棕色的背景中呈现黑色反应,l取出切片,l蒸馏水洗后镜下观察(以肾小球毛细血管基底膜出现黑色的银沉淀为准)。如果着色深度不够,l可用蒸馏水冲洗后放回六胺银工作液中继续染色。
(10)蒸馏水稍洗。
(11)0.1%氯化金水溶液调色2min。
(12)蒸馏水稍洗。
(13)3%硫代硫酸钠液处理3min。
(14)自来水冲洗5min。
(15)HE浅染(作为对比染色)。
(16)各级乙醇脱水,l二甲苯透明,l中性树胶封固。
3.染色结果11肾小球囊基底膜和肾毛细血管球基底膜皆呈黑色。真菌、i弹力纤维和一些网状纤维也呈黑色。细胞核呈蓝色,l细胞质呈红色。