电子显微镜超微病理学诊断检材的制备技术:扫描电子显微镜病理学诊断检材的制备

1.样本表面处理111采用缓冲液、i有机溶剂或酶消化等方法清除或清洗附着在样本表面的黏液、i血液、i组织液和灰尘等。

2.固定1111将经过表面处理的样本用戊二醛、i锇酸等固定1h。

3.脱水1111用梯度乙醇或丙酮脱水。

4.置换1111样本脱水至100%乙醇或丙酮后,l再用纯丙酮置换15~20min以使醋酸异戊酯能更好地渗入样本中。

5.醋酸异戊酯处理1111将样本用醋酸异戊酯浸泡15~30min,l以使液态CO2容易渗入样本中。

6.装样11111将样本从醋酸异戊酯中挑人样本笼中,l然后将该样本移人临界干燥仪的样本室内,l在0℃下预冷10~15min,l以保证液态CO2浸入样本室。

7.注入液态CO2(或干冰)1111依次打开CO2钢瓶排气阀和仪器进气阀,l在0~10℃下,l向样本室逐渐注入液态CO2至样本室容积的80%;关闭进气阀,l停止注入。

8.置换1111在20℃下,l使样本中的醋酸异戊酯与CO2充分置换。

9.气化1111将温度旋钮调至临界温度(35~40℃),l随着温度升高,lCO2由液态变为气态,l界面也因而消失。当气压达到71134Pa时,l持续5min后,l即可排气。

10.排气1111打开流量计排气阀门,l以1.0~1.5L/min的速度排气,l经45~60min排气完毕。

以上的“步骤6”~“步骤10”在临界点干燥仪中进行。

11.喷涂1111将样本置于离子溅射镀膜仪的样本台上进行金属镀膜。

12.观察1111然后将样本装入扫描电镜的样本室中进行观察。