(一)细胞表面抗原的免疫荧光检测

1.直接免疫荧光染色法

(1)将单细胞悬液加入试管中，l轻轻倾斜试管，l将上清液吸除。

(2)加入冷PBA1200u1，l离心洗涤，l弃上清液[PBA为等渗磷酸盐缓冲液(PBS)加2％牛血清清蛋白，l加0.1％叠氮钠]。

(3)JJn人用PBA稀释的荧光素标记的单克隆抗体200u1(稀释倍数由预实验确定)[其中一组试管中加入用同样荧光素标记的正常小鼠IgG(或IgM)作为对照]，l用微量加液器轻轻吹打混匀，l4℃或置冰上孵育30min。

(4)离心后弃上清液。

(5)加入冷PBS1200μl，l离心洗2次，l以除去未结合的多余抗体成分。

(6)向细胞中加入冷PBS1200u1，l吹打混匀，l置测试管中，l4℃避光保存，l待测。

2.间接免疫荧光染色法

(1)、i(2)同直接法。

(3)加入用200μl1PBA适当稀释的小鼠抗人某种抗原的单克隆抗体(第一抗体)和正常小鼠IgG(对照)，l轻轻吹打混匀，l4℃或置冰浴中孵育30min，l离心，l弃上清液。

(4)冷PBA离心洗涤1次，l以去除多余的未结合的特异性抗体。

(5)加入用PBA适当稀释以荧光素标记的第二抗体——羊抗鼠IgG-FITC(或1IgM-FITC)200μl。吹打混匀，l4℃或置冰浴中孵育30min，l避光。

(6)冷PBA离心洗涤2次。

(7)将细胞重新悬浮于200μl1PBS中，l混匀，l置流式测试管中，l避光，l4℃冰箱保存，l待测。

(二)DNA定量分析的染色方法

较常用PI荧光染色法，l参见本节“二、i”项“(二)新鲜实体瘤单细胞脱核悬液的制备”。