1.待检组织的准备。

(1)石蜡包埋组织：i制备10um厚常规石蜡切片3～8片，l置于1.51ml1Eppendorf离心管，l进行二甲苯脱蜡，l梯度乙醇洗涤，l干燥。

(2)新鲜组织或冷冻切片：i将约50～100mg组织切碎。

(3)体液或其他标本：i参阅有关分子生物学技术手册。

2.将以上组织加入500μl消化缓冲液中，l54℃下过夜。

消化缓冲液：i

Tris-HCI(pH8.0)11111500mmol／L

NaCl111111111111111111101mmol／L

EDTA11111111111111111101mmol／L

SDS11111111111111111111111111％

蛋白酶K1111111111111112001mg／ml

3.先以酚-氯仿-异戊醇(25：i24：i1)抽提1次，l再以等体积氯仿一异戊醇(24：i1)抽提1次。

4.取上层水相，l加1／l0体积的NaAc(2mol／L，lpH7.4)和2.5倍体积冰乙醇沉淀DNA，l－80℃下持续4h或过夜，l经41000r／min离心15min后，l弃上清液，l取沉淀溶于25u11TE缓冲液中，l－20℃下保存备用。

TE缓冲液：i

Tris-HCl111111111111110mmol/L

EDTA(pH8.0)1111111111mmol/L