光学显微镜摄影是应用显微照相机拍摄通过光学显微镜放大40～l1000倍的客体图像。

(一)摄影用显微镜性能要求

1.具有摄影目镜筒。

2.能通过目镜筒对图像进行对焦。

3.具有光镜选择移动杆。

4.物镜具有分辨率良好平视场像。

5.聚光镜具有孔径光阑和调节光轴中心的机构。

6.具有视场光阑。

7.光源亮度足够，l电压可以调节。

8.具有插入滤色镜的槽口。

(二)显微摄影的基本装置

1.具有自动输片功能的35mm照相机背。

2.具有对不同光照条件进行光路调节的调节杆。

3.具有能对不同标本面积进行自动测光的装置。

4.具有与显微镜相连接的接圈、i平场消色差物镜(Splan，lDplan)和聚光镜。

5.具有显微摄影控制台。

(三)显微摄影要点

1.显微照相机必须安放稳定，l具有一定防震性，l室内光线应暗些以避免散射光进入目镜。

2.选择适当的彩色或黑白底片装入照相机身(暗盒)。拍摄常规HE染色、i特殊染色、i免疫组化染色切片的病变，l宜用感光度ASA为100的彩色或黑白底片；拍摄培养细胞和免疫荧光染色标本，l宜用感光度ASA为400的彩色或黑白底片。

3.调节照明和光照。

(1)打开电源，l调节电压(约为9V)。

(2)视场光阑收缩到取景框边缘外。

(3)孔径光阑调到物镜孔径数值的60％～80％，l例如孔径为0.25的10×物镜，l聚光镜上光阑应调到：i0.25×60％～80％＝0.15～0.2。

(4)光通路调节。

①常规摄影：i先将视野与照明合轴、i再将聚光镜调中，l使光线同时调到观察目镜和取景目镜的视野之中，l以便于边观察边曝光摄影。如图像分布均匀，l将曝光增减旋钮(EXPOSURE1ADJ)调至“1”处。

②暗视野、i荧光和偏振光摄影：i将光线100％调到取景目镜的视野之中，l用调焦镜观察视野中的标本图像，l进行摄影。如图像分布不均匀，l应将曝光增减旋钮调于0.25～4之间。

4.调节和校准取景目镜于标准状态。旋转调焦镜镜筒上的圆环，l使取景框中央的双十字线达到最清晰。

5.将切片等标本放置在载物台上，l先用观察目镜选定摄影图像，l再用取景目镜调整摄影图像，l并转动微调旋钮，l同时使图像与取景框中的双十字线像达到最清晰。

6.用彩色底片摄影时，l必须用色温计调节色温。

(1)将光通路100％到达色温计上(由调焦镜中看不到光线)。

(2)观察色温指示表，l用平衡滤色镜(使用目光型底片时用雷登80系列)和灯光亮度将色温调至最佳色温点(日光型底片的色温点为51600K左右，l灯光型底片的色温点定为31200K左右)。

7.用黑白底片摄影时，l必须按下列对应关系选择滤色片以提高图像反差和清晰度：i

标本颜色1111红11111111橙11111111黄111111111绿11111111111深蓝

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滤1色1镜11蓝、i绿1111蓝、i绿111111蓝1111111红、i蓝1111111深绿、i橙

8.检查光线可达到底片的位置，l确定正确的曝光时间和进行曝光；或用自动摄影控制台上的按键曝光。

9.记录图像的摄影日期、i摄影编号、i样品编号、i放大倍数、i内容、i摄影条件和备注等。

10.将已全部摄影过的底片退回底片暗盒内，l取出底片并进行暗室冲洗等后期处理。