(一)透射电镜摄影
1.检查电镜工作状态,l确认样本无漂移现象,l选择好曝光条件。
2.调节好灯丝像,l消正像散。
3.选择视野,l确定放大倍数。
4.调整物镜光阑:i样品反差较强时,l使用较大的物镜光阑孔,l直至反差适中为止;反差小时,l宜用较小的光阑孔。
5.样本聚焦在低倍电镜(<11500倍)图像时,l可采用摇摆聚焦法用肉眼定位}样品聚焦在高倍电镜(>11500倍)图像时,l除用肉眼观察定位外,l还须采用系列拍照法:i于确定焦点后,l用细调钮聚焦,l增加物镜电流,l每调动一级最小钮拍摄i张底片,l总计拍摄4~5张,l从中选择最佳底片。
6.放平荧光屏,l传送底片使之进入摄影位置。
7.调定曝光亮度和速度,l然后启动快门进行曝光;曝光结束后,l将底片送人储存盒内。将底片全部摄影的储存盒取出,l进行暗室冲洗等后期处理。
8.用于透射电镜摄影的底片一般为色盲片(对红光不感光),l曝光时间为2~4s,lASA为8~25s。
(二)扫描电镜摄影
1.检查电镜工作状态。
(1)加速电压强度的选择:i取决于样品的性质、i图像反差和放大倍率。高倍观察时一般需要较高的加速电压,l低倍观察时需要较低的加速电压。
(2)聚光镜电流的选择:i在保证图像亮度和反差要求前提下,l尽可能加大聚光镜电流,l以提高照片分辨力,l加大景深。
(3)物镜光阑孔的选择:i对于表面结构高低差异大的样本可用较小的光阑孔,l以获较大景深;低倍镜下观察时,l可选用较大光阑孔,l以增加视野内的信号强度。
(4)选择摄影扫描速度。
(5)视野选择:i与透射电镜相同。
2.确定曝光时间。在扫描电镜照相机处于光圈F8或F11情况下,l照片的曝光时间在50~100s之间。
3.样品的聚焦程度主要依靠操作人员的肉眼观察。拍摄较低放大倍数(<11000倍)的图像,l以调节粗聚焦钮为主;拍摄较高放大倍数(>11000倍)图像,l应先调节粗聚焦钮,l再调节细聚焦钮。
4.图像消像散。
(1)先调节x方向旋钮,l消除x方向的像散。
(2)再调节Y方向旋钮,l消除Y方向的像散。
(3)最后再调节细聚焦钮,l直到图像最清晰为止。
5.调节高度和反差。扫描电镜一般装有亮度和反差自动调节按钮,l按动该钮即可得到反差适当的图像。
6.拍摄。将照相机中的底片调至摄影位置,l按动面板上的摄影快门钮,l荧光屏上便由上而下自动扫描图像;扫描结束后,l即完成一幅照片拍摄。
7.底片选择。扫描电镜装有120或135照相机,l故一般选择感光速度为1ASAl00的120或135胶卷;装有Polaroid后背相机的扫描电镜,l可进行一次成像。
8.记录图像的摄影日期、i摄影编号、i样本编号、i放大倍数、i内容、i摄影条件和备注等。