【原理】

ECLEA是将化学发光物质作为酶的发光底物，l由酶触发化学发光物质激发过程，l产生光子。通过酶标抗原或抗体问的竞争性或非竞争性免疫结合反应，l形成酶标复合物，l再加化学发光底物，l经酶促反应发光。其发光持续时间可长达301min以上，l同时发光强度也大为提高，l改善了信噪比，l提高了灵敏度。目前常用的ECLEA系统有2种：i

1.辣根过氧化物酶-H2O2一鲁米诺一增强剂系统11在此系统中辣根过氧化物酶(HRP)可使H2O2产生新生O2作用于鲁米诺，l形成激发态中间体，l并分解发光，l经增强剂(如对位碘酚、i对位苯基酚)作用，l可使发光时间延续30min以上，l信号强度增加11000倍以上。该系统已开发成熟的商业性试剂如Amerlite系统。

2.碱性磷酸酶-环1，l2-二氧乙烷衍生物系统11常用的发光底物为金刚烷基1，l

一二氧乙烷磷酸盐以及3-(2-螺旋金刚烷)-4-甲氧基-4-(3-磷酸氧基)-苯基-1，l2-二环二氧乙烷，l简称AMPPD。AMPPD经酶解去除芳香基团上的一个磷酸基，l得到中等“稳定”的中间体AMPPD-(半衰期2～301min)，l并进一步裂解为金刚烷酮和激发态的间氧苯甲酯阴离子，l当其跃迁回到基态时产生光子(波长4701nm)。AMPPD在碱性和热环境下稳定性好，l故本底低，lpH17.0时，l室温下分解半衰期长，lpH9.5时酶解速度快，l发光持续15～601min，l光强度稳定，l在0.1％BSA的反应液中发光强度明显增强。

现以DPC公司的仪器为例加以说明。

【试剂盒】

1.校正试剂11参见时间分辨荧光免疫分析。

2.碱性磷酸酶(AP)标记抗体或抗原11要求标记物稳定不失活。4℃可保存数月。

3.Test1unit11为盛有抗体包被小珠的测试杯，l兼作离心管用，l在1万r／s的离心作用下清洗包被珠并将洗涤液排出到测试杯的外圈夹层中，l为公司的专利。

4.发光底物

【检测步骤】

全部试验过程均在IMMULITE全自动化学发光免疫检测系统上按预设程序自动完成，l用时约501min(一步法)或801min(二步法)。以一步法为例，l检测步骤如下：i

(1)依次在Test1unit中加入待测标本或校正试剂+AP标记的抗原或抗体。

(2)37℃温育30～601min。

(3)高速离心除去未结合抗原或抗体。

(4)离心洗涤3次。

(5)加入发光底物，l反应101min。

(6)光量子检测系统读取发光强度并经数据处理计算待测物质浓度。

【资料保存及报告要求】

参见时间分辨荧光免疫分析。

【质量控制】

见放射免疫部分。

【注意事项】

(1)应严格按照仪器说明书要求做好维护保养工作，l保持管路清洁畅通。

(2)系统对运行环境要求较高，l应严格控制室内温度和湿度。

(3)所有定标液、i质控液、i标本和test1unit在操作前必须在20～25℃，l试剂和标本应充分混匀。